액체 크로마토그래피. 의약품에서 고성능 액체 크로마토그래피 사용의 특징 액체 크로마토그래피 방법의 본질

(주로 분자간) 계면에서. 분석 방법으로서 HPLC는 연구 대상의 복잡성으로 인해 초기 복합 혼합물을 비교적 단순한 것으로 예비 분리하는 것을 포함하는 방법 그룹의 일부입니다. 그런 다음 얻은 단순한 혼합물을 기존의 물리화학적 방법이나 크로마토그래피용으로 개발된 특수 방법으로 분석합니다.

HPLC 방법은 화학, 석유 화학, 생물학, 생명 공학, 의약, 식품 가공, 환경 보호, 의약품 생산 및 기타 여러 분야에서 널리 사용됩니다.

HPLC는 분석 또는 분리된 물질의 분리 메커니즘에 따라 흡착, 분포, 이온 교환, 배제, 리간드 교환 등으로 구분됩니다.

실제 작업에서 분리는 종종 하나가 아니라 여러 메커니즘에 의해 동시에 진행된다는 점을 명심해야합니다. 따라서 배제 분리는 흡착 효과, 흡착-분포 및 그 반대에 의해 복잡해질 수 있습니다. 동시에 이온화 정도, 염기성 또는 산성도 측면에서, 분자량, 분극성 및 기타 매개변수 측면에서 시료 내 물질의 차이가 클수록 다른 분리 메커니즘이 나타날 가능성이 높습니다. 그러한 물질에 대한.

순상 HPLC

고정상은 이동상보다 극성이 높으므로 비극성 용매가 용리액 조성에서 우세합니다.

헥산:이소프로판올 = 95:5(저극성 물질의 경우)
클로로포름:메탄올 = 95:5(중간 극성 물질의 경우)
클로로포름:메탄올 = 80:20(극성 물질의 경우)

역상 HPLC

고정상은 이동상보다 극성이 낮으므로 물은 거의 항상 용리액에 존재합니다. 이 경우 이동상에서 BAS의 완전한 용해를 보장하는 것이 항상 가능하고 UV 검출을 사용하는 것이 거의 항상 가능하며 거의 모든 이동상이 상호 혼화성이고 기울기 용출을 사용할 수 있으며 컬럼을 신속하게 재처리할 수 있습니다. -평형화되면 컬럼을 재생성할 수 있습니다.

역상 HPLC의 일반적인 용리액은 다음과 같습니다.

아세토니트릴: 물
메탄올: 물
이소프로판올: 물

HPLC용 매트릭스

HPLC에 사용되는 매트릭스는 실리카(실리카겔) 또는 알루미나와 같은 무기 화합물 또는 폴리스티렌(디비닐벤젠과 가교) 또는 폴리메타크릴레이트와 같은 유기 중합체입니다. 물론 실리카겔은 이제 일반적으로 받아들여지고 있습니다.

매트릭스의 주요 특성:

입자 크기(μm)
내부 기공 크기(Å, nm).

HPLC용 실리카겔 얻기:

폴리규산의 미소구체 형성;
실리카겔 입자 건조;
공기 분리.

흡착제 입자:

일반(구형): 더 높은 압력 저항, 더 높은 비용;
비구형: 낮은 압력 저항.

HPLC에서 기공 크기는 가장 중요한 매개변수 중 하나입니다. 기공 크기가 작을수록 용출 물질 분자에 대한 투과성이 나빠집니다. 결과적으로 흡착제의 흡착 능력이 나빠집니다. 기공이 클수록 흡착제 입자의 기계적 안정성이 첫째로 낮아지고 둘째로 흡착 표면이 작을수록 효율이 나빠집니다.

고정상 이식편

순상 HPLC:

프로필니트릴(니트릴)로 그래프트된 고정상;
프로필아민 그래프팅(아민)이 있는 고정상.

역상 HPLC:

알킬 그래프트가 있는 고정상;
알킬실릴 그래프트가 있는 고정상.

엔드 캡핑 - "작은" 분자를 추가로 접목하여 흡착제의 접목되지 않은 영역을 보호합니다. 소수성 말단 캡핑(C1, C2): 더 높은 선택성, 더 나쁜 습윤성; 친수성 말단 캡핑(디올): 낮은 선택성, 높은 습윤성.

HPLC 검출기

자외선
다이오드 어레이
형광등
전기화학
굴절계
대량 선택

연결

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HPLC- 고성능 액체 크로마토 그래피 ... 러시아어 약어 사전

HPLC- 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 복잡한 물질 혼합물을 분리하는 효과적인 방법 중 하나로 분석 화학 및 화학 기술에서 널리 사용됩니다. 크로마토 그래피 분리의 기본은 참여입니다 ... Wikipedia

서적

실용적인 고성능 액체 크로마토그래피, Veronica R. Mayer. 현대적인 방법과 장비로 확장된 제5판을 독자 여러분께 선보입니다. 이 책에서 많은 부분이 개선되었고 많은 참고 문헌이 추가되었습니다. 본문의 장소는...

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 이동상(MP)이 정지상(흡착제)으로 채워진 크로마토그래피 컬럼을 통해 이동하는 액체인 컬럼 크로마토그래피 방법입니다. HPLC 컬럼은 컬럼 입구의 높은 수압을 특징으로 하기 때문에 HPLC를 "고압 액체 크로마토그래피"라고도 합니다.

물질 분리 메커니즘에 따라 흡착, 분포, 이온 교환, 배제, 키랄 등 HPLC의 변형이 구별됩니다.

흡착 크로마토그래피에서 물질의 분리는 표면이 발달된 흡착제의 표면(예: 실리카겔)에서 흡착 및 탈착되는 능력이 다르기 때문에 발생합니다.

Partition HPLC에서는 고정상(일반적으로 고정상 지지체 표면에 화학적으로 접목됨)과 이동상 사이에서 분리하고자 하는 물질의 분포 계수의 차이로 인해 분리가 발생합니다.

PF와 NF HPLC는 극성에 따라 순상과 역상으로 나뉩니다.

순상 크로마토그래피는 극성 흡착제(예: 실리카겔 또는 NH 2 또는 CN 그룹이 그래프트된 실리카겔) 및 비극성 PF(예: 다양한 첨가제가 포함된 헥산)를 사용하는 크로마토그래피의 변형입니다. 역상 크로마토그래피에서는 비극성 화학적 변형 흡착제(예: 비극성 C 18 알킬 라디칼) 및 극성 이동상(예: 메탄올, 아세토니트릴)이 사용됩니다.

이온 교환 크로마토그래피에서, 용액에서 양이온과 음이온으로 해리된 혼합물의 물질 분자는 흡착제의 이온 그룹과의 서로 다른 교환 비율로 인해 흡착제(양이온 교환기 또는 음이온 교환기)를 통과할 때 분리됩니다. .

크기 배제(체, 겔 투과, 겔 여과) 크로마토그래피에서 물질 분자는 고정상의 기공으로 침투하는 능력이 다르기 때문에 크기에 따라 분리됩니다. 이 경우 고정상의 최소 기공으로 침투할 수 있는 가장 큰 분자(가장 높은 분자량)가 컬럼을 먼저 떠나고 분자 크기가 작은 물질이 마지막으로 떠납니다.

종종 분리는 하나가 아니라 여러 메커니즘에 의해 동시에 진행됩니다.

HPLC 방법은 비기체 분석물의 품질 관리에 사용할 수 있습니다. 분석을 위해 액체 크로마토그래피와 같은 적절한 기기가 사용됩니다.

액체 크로마토그래프의 구성은 일반적으로 다음과 같은 주요 구성 요소를 포함합니다.

– 이동상이 있는 탱크(또는 이동상의 일부인 개별 용매가 있는 탱크) 및 PF 가스 제거 시스템을 포함하는 PF 준비 장치;

– 펌핑 시스템;

- 이동상 혼합기(필요한 경우)

– 시료 주입 시스템(주입기);

– 크로마토그래피 컬럼(온도 조절 장치에 설치 가능);

- 탐지기;

– 데이터 수집 및 처리 시스템.

펌핑 시스템

펌프는 주어진 일정한 속도로 PF를 컬럼에 공급합니다. 이동상의 구성은 분석 중에 일정하거나 변경될 수 있습니다. 첫 번째 경우에 프로세스를 등용매라고 하고 두 번째 경우에는 그라디언트라고 합니다. 이동상을 필터링하기 위해 0.45 µm의 기공 직경을 가진 필터가 펌핑 시스템 전에 설치되는 경우가 있습니다. 최신 액체 크로마토그래프 펌핑 시스템은 하나 이상의 컴퓨터 제어 펌프로 구성됩니다. 이를 통해 Gradient elution 동안 특정 프로그램에 따라 PF의 구성을 변경할 수 있습니다. 혼합기에서 PF 성분의 혼합은 저압(펌프 전)과 고압(펌프 후) 모두에서 발생할 수 있습니다. 믹서는 PF 준비 및 등용매 용출에 사용할 수 있지만 등용매 공정을 위해 PF 구성 요소를 미리 혼합하면 구성 요소의 더 정확한 비율이 달성됩니다. 분석용 HPLC 펌프를 사용하면 최대 50 MPa의 컬럼 입구 압력에서 0.1 ~ 10 ml/min 범위의 컬럼으로 PF의 일정한 유속을 유지할 수 있습니다. 그러나 이 값은 20MPa를 초과하지 않는 것이 좋습니다. 압력 맥동은 펌프 설계에 포함된 특수 댐퍼 시스템으로 최소화됩니다. 펌프의 작동 부품은 부식 방지 재료로 만들어져 PF 구성에 공격적인 구성 요소를 사용할 수 있습니다.

"천연 및 폐수 오염물질의 고성능 액체 크로마토그래피"

소개

1장. 액체 크로마토그래피 방법의 기본 개념 및 분류

1.1 액체 크로마토그래피용 장치

2장. HPLC의 본질

2.1 신청

3장. 환경 물체 분석에 HPLC를 사용한 예

4장 HPLC 기기

문학

부록

소개

크로마토그래피 방법유사한 구조를 가진 유기 화합물의 식별 및 정량화에 종종 필수 불가결한 요소입니다. 환경 오염 물질의 일상적인 분석에 가장 널리 사용되는 것은 가스 및 고성능 액체 크로마토그래피입니다. 음용수 및 폐수의 유기 오염물질에 대한 가스 크로마토그래피 분석은 처음에는 충전식 컬럼의 사용을 기반으로 했으나 나중에는 석영 모세관 컬럼도 널리 보급되었습니다. 모세관 컬럼의 내부 직경은 일반적으로 0.20-0.75 mm, 길이 - 30-105 m입니다. 페닐 함량이 있는 메틸페닐 실리콘으로 만들어진 다양한 필름 두께를 가진 모세관 컬럼을 사용할 때 수중 오염 물질 분석의 최적 결과가 가장 자주 달성됩니다. 5% 및 50% 그룹 . 시료 주입 시스템은 종종 모세관 컬럼을 사용하는 크로마토그래피 기술에서 취약한 지점이 됩니다. 시료 주입 시스템은 범용 및 선택의 두 그룹으로 나눌 수 있습니다. 범용 시스템에는 흐름 분할이 있거나 없는 주입 시스템, 컬럼으로의 "저온" 주입 및 온도 프로그래밍을 통한 증발이 포함됩니다. 선택적 주입은 중간 트래핑, 헤드스페이스 분석 등의 퍼지를 사용합니다. 범용 주입 시스템을 사용하는 경우 전체 샘플이 컬럼으로 들어가고 선택적 주입에서는 특정 부분만 도입됩니다. 컬럼에 유입된 분획에는 휘발성 물질만 포함되어 있고 기술을 완전히 자동화할 수 있기 때문에 선택적 주입으로 얻은 결과는 훨씬 더 정확합니다.

오염 물질 모니터링에 사용되는 가스 크로마토그래피 검출기는 이동상의 각 성분에 반응하는 범용 검출기와 유사한 화학적 특성을 가진 특정 그룹의 물질의 이동상에 존재하는 것에 반응하는 선택적 검출기로 종종 구분됩니다. 보편적인 것들은 화염 이온화, 원자 방출, 질량 분석 검출기 및 적외선 분석을 포함합니다. 물 분석에 사용되는 선택적 검출기는 전자 포획(할로겐 원자를 포함하는 물질에 선택), 열이온(질소 및 인 함유 화합물에 선택), 광이온화(방향족 탄화수소에 선택), 전기분해 전도도 검출기(할로겐 원자를 포함하는 화합물에 선택) , 황 및 질소 원자). 물질의 최소 감지 가능한 양은 나노그램에서 초당 피코그램까지입니다.

고성능 액체 크로마토 그래피(HPLC)는 가스 크로마토그래피를 사용하여 분석할 수 없는 많은 수의 열적으로 불안정한 화합물을 측정하는 데 이상적인 방법입니다. 현재, 메틸 카보네이트, 유기인계 살충제 및 기타 비휘발성 물질을 포함한 현대 농약은 종종 액체 크로마토그래피에 의한 분석 대상이 됩니다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 환경 모니터링에 사용되는 다른 방법 중에서 인기를 얻고 있습니다. 또한 샘플 준비 자동화 측면에서 밝은 전망이 있기 때문입니다.

제1장 액체크로마토그래피법의 기본 개념과 분류

액체 크로마토그래피는 고정상 지지체의 유형에 따라 여러 클래스로 나뉩니다. 종이와 박층 크로마토그래피의 간단한 계측으로 인해 분석 실습에서 이러한 방법이 널리 사용되었습니다. 그러나 컬럼 액체 크로마토그래피의 큰 가능성은 이 고전적인 방법에 대한 장비의 개선을 자극하고 HPLC의 급속한 도입으로 이어졌습니다. 용리액을 고압의 컬럼에 통과시키면서 미세하게 분산된 흡착제를 사용하여 분석 속도를 급격히 높이고 분리 효율을 크게 높일 수 있었습니다. HPLC 방법은 현재 유기 화합물의 복잡한 혼합물을 분리, 정량 및 정성적으로 분석하는 것을 가능하게 합니다.

분리된 물질(용출액)이 정지상과 상호작용하는 메커니즘에 따라 흡착, 분포, 이온 교환, 크기 배제, 이온 쌍, 리간드 교환 및 친화성 크로마토그래피가 구별됩니다.

흡착 크로마토그래피. 흡착 크로마토그래피에 의한 분리는 표면에 활성 극성 중심이 있는 산화알루미늄 또는 실리카겔과 같은 흡착제와 분리될 물질의 상호작용 결과로 수행됩니다. 용매(용리액)는 비극성 액체입니다. 수착 메커니즘은 흡착제의 극성 표면과 분석된 성분 분자의 극성(또는 극성화될 수 있는) 영역 사이의 특정 상호작용으로 구성됩니다(그림 1).

쌀. 1. 흡착 액체 크로마토그래피.

파티션 크로마토그래피. 액체 크로마토그래피의 분배 버전에서 물질 혼합물의 분리는 혼합할 수 없는 두 단계, 즉 용리제(이동상)와 흡착제(고정상)에 위치한 상 사이의 분포 계수의 차이로 인해 수행됩니다.

~에 정상 위상분할 액체 크로마토그래피는 비극성 용리제와 흡착제(대부분 실리카겔)의 표면에 그래프트된 극성기를 사용합니다. 니트릴, 아미노 그룹 등과 같은 극성 그룹을 포함하는 치환된 알킬클로로실란은 실리카겔 표면 개질제(결합상)로 사용됩니다(그림 2). 결합상을 사용하면 고정상 표면의 흡착 특성을 미세하게 제어하고 높은 분리 효율을 달성할 수 있습니다.

쌀. 2. 결합상이 있는 분할 크로마토그래피(순상 변형).

역상액체 크로마토그래피는 극성 용리액과 흡착제 표면에 그래프트된 비극성 그룹(긴 알킬 사슬) 사이의 혼합물 성분 분포를 기반으로 합니다(그림 3).

쌀. 3. 결합상이 있는 분할 크로마토그래피(역상 버전).

덜 널리 사용되는 것은 액체 고정상이 고정 지지체에 적용되는 지지상 액체 크로마토그래피의 변형입니다.

전용(겔침투)크로마토그래피는 흡착제의 기공에 위치한 용매와 입자 사이를 흐르는 용매 사이의 분자 분포로 인해 물질 분리가 발생하는 액체 크로마토그래피의 변형입니다.

아핀크로마토그래피는 분리된 단백질(항체)과 단백질과 선택적으로 복합체(접합체)를 형성하는 흡착제(합성 수지)의 표면에 이식된 물질(항원)의 특정 상호작용을 기반으로 합니다.

이온 교환, 이온 쌍, 리간드 교환 크로마토그래피는 주로 무기 분석에 사용됩니다.

크로마토그래피 분리의 기본 매개변수.

크로마토그래피 분리의 주요 매개변수는 혼합물 성분의 머무름 부피와 머무름 시간입니다(그림 4).

머무름 시간 tR은 시료가 컬럼에 주입된 순간부터 해당 피크의 최대값에 도달할 때까지 경과된 시간입니다. 머무름 시간에 용리액 부피 속도 F를 곱하면 머무름 부피 VR이 나옵니다.

보정된 머무름 시간은 비흡착성 성분의 피크가 나타나는 순간부터 해당 화합물의 피크까지 경과된 시간입니다.

tR" = tR - t0 ;

정규화 또는 수정된 머무름 부피는 컬럼 불감 부피 V0에 대해 수정된 머무름 부피, 즉 비흡착성 성분의 머무름 부피입니다.

VR" = VR - V0;

유지 특성은 또한 정전용량 계수 k"이며, 고정상의 물질 질량 대 이동상의 물질 질량의 비율로 정의됩니다. k" = mn/mp;

k"의 값은 크로마토그램에서 쉽게 확인할 수 있습니다.

크로마토그래피 분리의 가장 중요한 매개변수는 효율성과 선택성입니다.

이론단수의 높이(HETP)로 측정되고 그 수(N)에 반비례하는 컬럼의 효율은 높을수록 동일한 머무름 시간에 나타나는 물질의 피크가 좁아집니다. 효율성 값은 다음 공식을 사용하여 크로마토그램에서 계산할 수 있습니다.

N = 5.54. (tR/1/2) 2 ,

어디 tR- 유지 시간,

승 1/2 - 절반 높이에서 피크 너비

컬럼당 이론단수, 컬럼 길이 L 및 흡착제의 평균 입자 직경 dc를 알면 이론단 등가 높이(HETP) 및 감소 높이(PHETP) 값을 쉽게 얻을 수 있습니다.

HETP = L/N PHETP = HETP/d c

이러한 특성을 통해 다양한 유형의 컬럼 효율성을 비교하고 흡착제의 품질과 컬럼을 채우는 품질을 평가할 수 있습니다.

두 물질의 분리 선택성은 다음 방정식에 의해 결정됩니다.

두 성분 혼합물의 분리를 고려할 때 분리 정도 RS도 중요한 매개변수입니다.

;

RS 값이 1.5보다 크거나 같으면 피크가 해결된 것으로 간주됩니다.

주요 크로마토그래피 매개변수는 분해능에 대한 다음 방정식과 관련됩니다.

;

분리 선택성을 결정하는 요인은 다음과 같습니다.

1) 흡착제의 화학적 성질;

2) 용매 및 이의 개질제의 조성;

3) 분리할 혼합물 성분의 화학적 구조 및 특성;

4) 컬럼 온도

1.1 액체 크로마토그래피용 장치

현대 액체 크로마토그래피에서는 가장 단순한 시스템에서 다양한 추가 장치가 장착된 고급 크로마토그래피에 이르기까지 다양한 정도의 복잡성을 지닌 기기가 사용됩니다.

무화과에. 그림 4는 크로마토그래피 시스템에 존재하는 최소한의 구성 요소 집합을 포함하는 액체 크로마토그래피의 블록 다이어그램을 보여줍니다.

쌀. 4. 액체 크로마토그래프의 블록 다이어그램.

펌프(2)는 일정한 용매 흐름을 생성하도록 설계되었습니다. 설계는 주로 시스템의 작동 압력에 의해 결정됩니다. 10-500 MPa 범위에서 작동하려면 플런저(주사기) 또는 피스톤 유형 펌프가 사용됩니다. 첫 번째의 단점은 용리액을 채우기 위해 주기적인 중지가 필요하고 두 번째는 설계가 매우 복잡하고 결과적으로 높은 가격이라는 것입니다. 1-5 MPa의 낮은 작동 압력을 가진 간단한 시스템의 경우 저렴한 연동 펌프가 성공적으로 사용되지만 일정한 압력과 유속을 달성하기가 어렵 기 때문에 준비 작업에 사용이 제한됩니다.

주입기(3)는 분리된 성분 혼합물의 샘플이 충분히 높은 재현성으로 컬럼에 주입되도록 합니다. 간단한 "정지 흐름" 시료 주입 시스템은 펌프를 정지해야 하므로 Reodyne의 루프 피펫보다 덜 편리합니다.

HPLC 컬럼(4)은 고압을 견딜 수 있는 두꺼운 벽의 스테인리스 스틸 튜브입니다. 컬럼을 흡착제로 채우는 밀도와 균일성이 중요한 역할을 합니다. 저압 액체 크로마토그래피의 경우 벽이 두꺼운 유리 컬럼이 성공적으로 사용됩니다. 온도 불변성은 온도 조절 장치(5)에 의해 보장됩니다.

액체 크로마토그래피용 검출기(6)에는 흐르는 용리액의 일부 특성이 연속적으로 측정되는 플로우 셀이 있습니다. 가장 널리 사용되는 범용 검출기는 굴절률을 측정하는 굴절계와 고정된 파장(일반적으로 자외선 영역)에서 용매의 흡광도를 측정하는 분광광도계입니다. 굴절계의 장점(및 분광 광도계의 단점)은 발색단 그룹을 포함하지 않을 수 있는 결정되는 화합물 유형에 대한 낮은 감도를 포함합니다. 반면에 굴절계의 사용은 등용매 시스템(일정한 용리액 조성)으로 제한되므로 이 경우 용매 구배를 사용할 수 없습니다.

환경오염물질 분석에 가장 많이 사용되는 HPLC 컬럼은 길이 25cm, 내경 4.6mm로 옥타데실기가 접목된 5~10μm 구형 실리카겔 입자로 채워져 있습니다. 최근에는 더 작은 입자로 채워진 더 작은 내경의 컬럼이 등장했습니다. 이러한 컬럼을 사용하면 용매 소모량과 분석 시간이 줄어들고 감도와 분리 효율이 증가하며 컬럼을 분광 검출기에 연결하는 문제가 쉬워집니다. 내부 직경이 3.1mm인 컬럼에는 안전 카트리지(예비 컬럼)가 장착되어 있어 서비스 수명을 늘리고 분석의 재현성을 향상시킵니다.

최신 HPLC 기기의 검출기로는 다이오드 어레이의 UV 검출기, 형광 및 전기화학 검출기가 일반적으로 사용됩니다.

실제 작업에서 분리는 종종 하나가 아니라 여러 메커니즘에 의해 동시에 진행된다는 점을 명심해야합니다. 따라서 배제 분리는 흡착 효과, 흡착-분포 및 그 반대에 의해 복잡해질 수 있습니다. 동시에 이온화 정도, 염기도 또는 산성도 측면에서, 분자량, 분극성 및 기타 매개변수 측면에서 시료 내 물질의 차이가 클수록 분리 메커니즘이 다를 가능성이 커집니다. 물질.

실제로 고정상은 극성이 아니지만 이동상은 극성인 "역상"(분할) 크로마토그래피(즉, "직상" 크로마토그래피의 역)가 가장 널리 보급되었습니다.

전 세계 대부분의 실험실에서 16개의 우선순위 PAH 그룹이 HPLC 또는 CMS로 분석됩니다.

2장. HPLC의 본질

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에서 크로마토그래피 컬럼에서 발생하는 공정의 특성은 일반적으로 가스 크로마토그래피의 공정과 동일합니다. 차이점은 액체를 고정상으로 사용하는 것뿐입니다. 액체 이동상의 고밀도와 컬럼의 높은 저항으로 인해 기체 및 액체 크로마토그래피는 기기에서 크게 다릅니다.

HPLC에서 순수 용매 또는 이들의 혼합물은 일반적으로 이동상으로 사용됩니다.

액체 크로마토그래피에서 용리액이라고 하는 순수한 용매(또는 용매의 혼합물) 스트림을 생성하기 위해 크로마토그래프 유압 시스템의 일부인 펌프가 사용됩니다.

흡착 크로마토그래피는 표면에 활성 중심이 있는 실리카겔 또는 산화알루미늄과 같은 흡착제와 물질의 상호 작용 결과로 수행됩니다. 다른 샘플 분자의 흡착 중심과 상호 작용하는 능력의 차이는 컬럼을 통해 이동상과 함께 이동하는 과정에서 영역으로 분리됩니다. 이 경우에 달성되는 구성요소 영역의 분할은 용매 및 흡착제와의 상호작용에 따라 달라집니다.

다양한 부피, 표면 및 기공 직경을 갖는 실리카겔 흡착제는 HPLC에서 가장 큰 응용 분야를 찾습니다. 산화 알루미늄 및 기타 흡착제는 훨씬 덜 자주 사용됩니다. 이에 대한 주된 이유는 다음과 같습니다.

HPLC에 일반적으로 사용되는 고압에서 포장 및 사용을 허용하지 않는 불충분한 기계적 강도;

산화알루미늄에 비해 실리카겔은 다공성, 표면 및 기공 직경의 범위가 더 넓습니다. 산화알루미늄의 촉매 활성이 상당히 높으면 시료 성분의 분해 또는 비가역적인 화학 흡착으로 인해 분석 결과가 왜곡됩니다.

HPLC 검출기

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 극성 비휘발성 물질을 검출하는 데 사용되며, 어떤 이유로 유도체 형태라도 기체 크로마토그래피에 편리한 형태로 변환할 수 없습니다. 특히 이러한 물질에는 설폰산, 수용성 염료 및 페닐우레아 유도체와 같은 일부 살충제가 포함됩니다.

감지기:

UV - 다이오드 어레이 검출기. 포토다이오드의 "매트릭스"(200개 이상 있음)는 스펙트럼의 UV 및 가시 영역에서 신호를 지속적으로 등록하므로 스캐닝 모드에서 UV-B 스펙트럼의 기록을 보장합니다. 이를 통해 특수 셀을 빠르게 통과하는 구성 요소의 왜곡되지 않은 스펙트럼을 고감도로 지속적으로 기록할 수 있습니다.

피크의 "순도"에 대한 정보를 제공하지 않는 단일 파장 검출과 비교하여 다이오드 어레이의 전체 스펙트럼을 비교하는 기능은 훨씬 더 확실하게 식별 결과를 제공합니다.

형광 검출기. 형광 검출기의 큰 인기는 매우 높은 선택성과 감도, 그리고 많은 환경 오염 물질(예: 다방향족 탄화수소)이 형광을 발한다는 사실 때문입니다.

전기화학적 검출기는 페놀, 메르캅탄, 아민, 방향족 니트로 및 할로겐 유도체, 알데히드, 케톤, 벤지딘과 같이 쉽게 산화되거나 환원되는 물질을 검출하는 데 사용됩니다.

PF의 느린 진행으로 인해 컬럼에서 혼합물의 크로마토그래피 분리는 오랜 시간이 걸립니다. 공정 속도를 높이기 위해 크로마토그래피는 압력 하에서 수행됩니다. 이 방법을 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)라고 합니다.

고전적인 액체 컬럼 크로마토그래피에 사용되는 장비의 현대화로 인해 이를 유망하고 현대적인 분석 방법 중 하나로 만들었습니다. 고성능 액체 크로마토그래피는 저분자량 및 고분자량 모두의 비휘발성 열 불안정성 화합물을 분리, 예비 분리 및 정성 및 정량 분석을 수행하는 편리한 방법입니다.

이 방법에 사용되는 흡착제의 유형에 따라 2가지 종류의 크로마토그래피가 사용됩니다. 비극성 용리제를 사용하는 극성 흡착제(직접 상 옵션) 및 극성 용리제를 사용하는 비극성 흡착제(소위 역방향) -상 고성능 액체 크로마토그래피(RPHLC).

용리액이 용리액으로 전달되면 RPHLC 조건에서 평형이 극성 흡착제 및 비수성 PF 조건보다 몇 배 빠르게 설정됩니다. 그 결과, 물 및 물-알코올 용리액으로 작업할 수 있는 편리함과 함께 RPHLC는 이제 큰 인기를 얻었습니다. 대부분의 HPLC 분석은 이 방법을 사용하여 수행됩니다.

탐지기. 별도 구성 요소의 열에서 출력 등록은 검출기를 사용하여 수행됩니다. 등록을 위해 혼합물 성분의 특성 및 양과 관련된 이동상에서 오는 분석 신호의 변화를 사용할 수 있습니다. 액체 크로마토그래피는 기존 용액의 흡광 또는 발광(광도 및 형광 검출기), 굴절률(굴절 검출기), 전위 및 전기 전도도(전기화학적 검출기) 등과 같은 분석 신호를 사용합니다.

지속적으로 감지된 신호는 레코더에 의해 기록됩니다. 크로마토그램은 기록 테이프에 기록된 일련의 검출기 신호로, 혼합물의 개별 구성 요소가 컬럼을 나갈 때 생성됩니다. 혼합물을 분리하는 경우 외부 크로마토그램에서 개별 피크를 볼 수 있습니다. 크로마토그램의 피크 위치는 물질 식별, 피크 높이 또는 면적의 정량적 측정을 위해 사용됩니다.

2.1 신청

HPLC는 다음과 같은 화학 분석 영역에서 가장 광범위한 응용 분야를 찾습니다(분석 대상은 HPLC가 실질적으로 경쟁이 없는 곳에서 식별됨).

· 식품 품질 관리 - 강장제 및 향료 첨가제, 알데히드, 케톤, 비타민, 설탕, 염료, 방부제, 호르몬, 항생제, 트리아진, 카바메이트 및 기타 살충제, 진균독, 니트로소아민, 다환 방향족 탄화수소 등

· 환경 보호 - 페놀, 유기 니트로 화합물, 단환 및 다환 방향족 탄화수소, 다수의 살충제, 주요 음이온 및 양이온.

· 범죄학 - 마약, 유기 폭발물 및 염료, 강력한 의약품.

· 제약 산업 - 스테로이드 호르몬, 유기 합성의 거의 모든 제품, 항생제, 고분자 제제, 비타민, 단백질 제제.

의학 - 질병 진단에서 생물학적 체액(아미노산, 퓨린 및 피리미딘, 스테로이드 호르몬, 지질)의 나열된 생화학 및 의약 물질 및 대사 산물, 개별 복용량의 목적을 위해 신체에서 약물의 배설 속도 결정 .

· 농업 - 필요한 비료의 양을 결정하기 위한 토양의 질산염 및 인산염 측정, 사료(아미노산 및 비타민)의 영양가 결정, 토양, 물 및 농산물의 살충제 분석.

생화학, 생물유기화학, 유전공학, 생명공학 - 당, 지질, 스테로이드, 단백질, 아미노산, 뉴클레오시드 및 그 유도체, 비타민, 펩티드, 올리고뉴클레오티드, 포르피린 등

· 유기 화학 - 유기 합성, 염료, 열에 불안정한 화합물, 비휘발성 화합물의 모든 안정적인 제품; 무기 화학(이온 및 복합 화합물 형태의 거의 모든 가용성 화합물).

· 식품, 알코올 및 무알코올 음료, 식수, 가정용 화학 물질, 향수의 모든 생산 단계에서 품질 관리 및 안전;

인공 재해 또는 비상 사태의 현장에서 오염의 성격 결정;

마약, 유력, 유독성 및 폭발성 물질의 탐지 및 분석;

기업 및 생물체의 액체 폐수, 대기 배출 및 고체 폐기물에서 유해 물질(다환 및 기타 방향족 탄화수소, 페놀, 살충제, 유기 염료, 중금속, 알칼리 및 알칼리 토금속 이온)의 존재 여부 확인

· 유기 합성, 석유 및 석탄 가공, 생화학 및 미생물 생산 공정의 모니터링;

비료를 위한 토양 품질, 토양, 물 및 제품에 있는 살충제 및 제초제의 존재 및 사료의 영양가 분석 복잡한 연구 분석 작업; 미량의 초순수 물질을 얻습니다.

3장. 환경 개체 분석에 HPLC를 사용한 예

HPLC - 환경 물체의 PAH 모니터링 방법

다환 방향족 탄화수소(PAH)의 경우 1급 위험 등급의 환경 독성 물질에 대해 자연물에서 극도로 낮은 수준의 최대 허용 농도(MAC)가 설정되었습니다. MPC 이하의 PAHs를 측정하는 것은 매우 복잡한 분석 작업 중 하나이며 이를 해결하기 위해 첨단 분석 방법(GC-MS, GC, HPLC)이 사용됩니다. 모니터링 방법을 선택할 때 고려 중인 주요 특성 외에 민감도와 선택성, 표현력 및 경제성이 추가되기 때문입니다. 모니터링에는 직렬 분석이 포함됩니다. 짧고 직경이 작은 컬럼의 HPLC 변형은 이러한 요구 사항을 상당 부분 충족합니다. 이 방법을 사용하여 저자는 에어로졸, 적설 및 지표수라는 세 가지 자연 매체에서 벤조[a]피렌을 모니터링하는 방법을 개발하고 인증했습니다. 이 방법은 다음과 같은 특징이 있습니다: 유기 용매로 PAH 추출 및 추출물 농축, 농축 추출물을 크로마토그래피 컬럼에 직접 도입, 스펙트럼의 UV 영역에서 다중 파장 광도 측정 사용, 식별 머무름 시간과 스펙트럼 비율이라는 두 가지 매개변수를 사용한 크로마토그램의 PAH 피크 0.3~450ng/m~50μg/m2의 농도 범위에서 에어로졸의 벤즈[a]피렌을 결정할 때 총 오차는 10%를 초과하지 않습니다. 우선 PAHs(최대 12개 화합물)의 동시 측정과 분석물의 불균일한 피크 등록의 경우 이동상의 선택성, 검출 파장 및 컬럼 온도의 변화로 추출물을 재분리하는 것이 제안되었으며, 결정되는 PAH의 개별 속성을 고려합니다.

1 . 주변 공기질. 벤조[a]피렌의 질량 농도. HPLC 방법으로 측정을 수행하는 절차. 증명증명서 MVI No. 01-2000.

2 . 표면 및 처리된 폐수의 품질. 벤조[a]피렌의 질량 농도. HPLC 방법으로 측정을 수행하는 절차. 증명증명서 MVI No. 01-2001.

3 . 눈 덮인 품질. 벤조[a]피렌의 질량 농도. HPLC 방법으로 측정을 수행하는 절차. 증명증명서 MVI No. 02-2001.

압연 구리 스케일의 Aluminothermic 회수 폐기물을 사용하여 수용액에서 아닐린 제거

폐수에서 탄화수소를 제거하는 문제는 시급한 과제입니다. 많은 화학, 석유 화학 및 기타 산업에서 아닐린 및 그 유도체가 형성되며 이는 독성 물질입니다. 아닐린은 MPC - 0.1 mg / m 3의 고독성 물질입니다. 아닐린 및 그 유도체는 물에 용해되므로 중력 침강으로 제거할 수 없습니다.

유기 오염 물질로부터 폐수를 처리하는 가장 좋은 방법 중 하나는 재생이 가능하고 재생이 불가능한 무기 및 유기 흡착제(알루미노실리케이트, 변성 점토, 목재, 섬유 등)를 사용하는 것입니다(활성탄, 거대 다공성 고분자 재료 등). . ).

재생 흡착제는 물에서 극성이 다른 유기 물질을 제거할 수 있습니다. 효과적인 흡착제를 찾는 것은 시급한 과제입니다.

이 보고서는 아닐린 흡착제로 Yerevan Cable Plant(OPMOERKZ)의 밀링된 구리 스케일을 사용하는 분야의 연구 결과를 제공합니다.

크로마토그래피 연구는 HPLC 크로마토그래피/고성능 액체 크로마토그래피/시스템(Waters 486 - 검출기, Waters 600S - 컨트롤러, Waters 626 - 펌프), 연구 중인 흡착제로 채워진 250 x 4mm 컬럼, 이동상 속도 1에서 수행되었습니다. ml/m / 이동상은 우리가 연구하고 있는 용매이고/ 검출기는 UV-254입니다. UV 분광 분석은 Specord-50 분광 광도계에서 수행되었으며 스펙트럼은 ASPECT PLUS 컴퓨터 프로그램을 사용하여 얻었습니다.

정확한 무게의 흡착제를 물에 있는 일정량의 아닐린에 첨가했는데, 초기 농도는 다양했습니다. 혼합물을 6시간 동안 완전히 흔든 다음 샘플을 침전되도록 두었다. 약 48시간 만에 흡착이 완료되며, 아닐린의 석출량은 UV 분광광도계와 굴절율 분석으로 측정하였다.

처음에 OPMOEPKZ의 흡착 특성은 사염화탄소 용액에서 아닐린을 제거하는 동안 연구되었습니다. 아닐린이 흡착제 3을 가장 잘 흡수한다는 것이 밝혀졌습니다(표).

0.01-0.0001mol/l 농도의 아닐린 수용액에 대해서도 측정하였다. 표는 0.01M 솔루션에 대한 데이터를 보여줍니다.

20°C에서 0.01M 아닐린 수용액으로부터 다양한 흡착제에 의한 아닐린 흡수

이전에는 표시된 농도 범위 내에서 흡착이 증가하고 굴절률에 선형적으로 의존한다는 것이 발견되었습니다. 아닐린의 양은 굴절률 대 몰 농도 플롯에서 결정되었고 액체 크로마토그래피 및 UV 스펙트럼 분석 모두에 대해 보정되었습니다.

흡착제 3은 수용액에서 가장 활성이 좋으며 흡착된 오염물질의 양은 초기 용액에 첨가된 오염물질의 총량과 최종 용액에 남아있는 잔류물의 차이로 계산하였다.

환경 물체의 PAH 측정 방법

일반적으로 가스 크로마토그래피(GC) 및 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 방법을 사용하여 PAH를 결정합니다. 정량 분석에 충분한 주요 16개 PAH의 분리는 가스 크로마토그래피의 모세관 컬럼 또는 HPLC에 사용되는 고성능 컬럼을 사용하여 이루어집니다. 16개 PAH의 보정 혼합물을 잘 분리하는 컬럼이 연구 중인 샘플에 수반되는 유기 화합물의 배경에 대해 잘 분리된다는 보장도 없음을 기억해야 합니다.

분석을 단순화하고 얻은 결과의 고품질을 달성하기 위해 대부분의 분석 절차에는 샘플의 다른 관련 화합물 그룹에서 PAH를 예비 분리(분리)하는 단계가 포함됩니다. 이를 위해 사용되는 가장 일반적인 방법은 실리카겔이나 알루미나를 사용하는 것과 같은 흡착 메커니즘을 사용하는 액체-고체 또는 액체-액체 시스템의 저압 액체 크로마토그래피이며 때로는 Sephadex를 사용한 흡착 및 배제와 같은 혼합 메커니즘이 사용됩니다.

샘플의 전처리를 사용하면 다음과 같은 영향을 피할 수 있습니다.

지방족 탄화수소와 같은 완전 비극성 화합물;

중간 및 강한 극성 화합물, 예를 들어 프탈란, 페놀, 다가 알코올, 산;

예를 들어, 수지와 같은 고분자량 화합물.

두 가지 유형의 검출기가 주로 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 사용됩니다: 형광 검출기 또는 광다이오드 막대 분광 광도 검출기. 형광 측정에서 PAH의 검출 한계는 매우 낮기 때문에 이 방법은 극미량의 다방향족 화합물을 측정하는 데 특히 적합합니다. 그러나 고전적인 형광 측정 검출기는 연구 중인 화합물의 구조에 대한 정보를 거의 제공하지 않습니다. 현대적인 디자인을 통해 개별 화합물의 특징인 형광 스펙트럼을 기록할 수 있지만 일상적인 측정에서는 아직 널리 보급되지 않았습니다. 광다이오드 라인(PDL)이 있는 분광광도계 검출기는 UV 및 가시광선 스펙트럼 범위에서 흡수 스펙트럼을 기록할 수 있게 하며 이러한 스펙트럼을 식별에 사용할 수 있습니다. 빠른 스캐닝 검출기를 사용하여 유사한 정보를 얻을 수 있습니다.

이러한 PAH의 분리, 식별 및 정량화를 위한 분석 기술을 선택할 때 다음 조건을 고려해야 합니다.

연구된 샘플에서 결정된 함량의 수준;

11. Gorshkov A.G., Marinaite I.I. HPLC - 환경 물체의 PAH 모니터링 방법

12. Torosyan G.O., Martirosyan V.A., Aleksanyan A.R., Zakaryan M.O. 압연 구리 스케일의 알루미늄 열 환원 폐기물을 사용하여 수용액에서 아닐린 제거

13. LA 투르키나, G.N. Koroleva 이온 고성능 액체 크로마토그래피에 의한 알칼리 토류 원소 및 마그네슘 측정 방법 개발

14. Dultseva G.G., Dubtsova Yu.Yu., Skubnevskaya G.I. 환경 내 카드뮴 복합체 분석

부록

크로마토그래피 방법에 의한 물의 클로마존 측정

방법론 지침 MUK 4.1.1415-03

1. 준비: 연방 위생 과학 센터. F.F.

에리스만; 모스크바 농업 아카데미. 카.에이.

티미리야제프; 러시아 보건부의 국가 위생 및 역학 감시부의 참여로. 방법론의 개발자는 끝에 나열됩니다.

3. 국가위생과장 승인

러시아 연방, 러시아 연방 보건부 차관보, acad. 램스 G.G. Onishchenko 2003년 6월 24일

5. 처음으로 도입되었습니다.

1. 소개

제조사: FMS(미국).

상품명: COMMAND.

유효 성분: 클로마존.

2-(2-클로로벤질)-4,4-디메틸-3-이속살리딘-3-온(IUPAC)

밝은 갈색의 점성 액체.

녹는점: 25 -C.

끓는점: 275 -C.

25 -C에서 증기압: 19.2 MPa.

n-옥탄올/물 분배 계수: K logP = 2.5.

아세톤, 헥산, 에탄올, 메탄올,

클로로포름, 디클로로메탄 및 아세토니트릴; 물에서의 용해도 -

1.10g/cu. 디엠 실온에서 최소 2년, 50 -C에서 최소 3개월 동안 안정합니다.

간략한 독성 프로필: 급성 경구

쥐에 대한 독성(LD) - 1369 - 2077 mg/kg; 급성 피부

쥐에 대한 독성(LD) - 2000 mg/kg 이상; 심각한

쥐에 대한 흡입 독성(LC) - 4.8 mg/cu. 디엠(4시간).

위생 기준. 물 중 MPC - 0.02 mg / cu. 디엠

약물의 범위. Clomazone은 발아 전 또는 파종 전 적용 동안 대두 및 벼 작물의 곡물 및 쌍자엽 잡초를 방제하는 데 사용되는 선택적 제초제입니다.

2. 물에서 클로마존을 측정하는 방법

크로마토그래피 방법

2.1. 키 포인트

2.1.1. 기술의 원리

이 기술은 헥산으로 분석된 샘플에서 클로마존 추출, 추출물 농도 및 대체 방법에 의한 후속 정량적 측정을 기반으로 합니다.

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)

자외선 검출기, 일정한 재조합 속도 검출기가 있는 기체 액체 크로마토그래피(GLC) 또는 박층 크로마토그래피(TLC). 정량적 측정은 절대 교정 방법으로 수행됩니다.

2.1.2. 방법 선택성

제안된 조건에서 이 방법은 시클로파라핀의 염소 유도체(HCH 이성질체), 디페닐 화합물(DDT 및 그 유도체), 대사산물 - 폴리염화 벤젠 및 페놀, 농작물에 제초제로 사용할 수 있는 나트륨 트리클로로아세테이트.

2.1.3. 방법의 도량형 특성(P = 0.95)

시약, 용액 및 재료

d. 함량이 있는 클로마존. 99.8%

(FMS, 미국)

질소, och GOST 9293-79

물 암모니아, 25%, h GOST 1277-81

아세톤, h GOST 2603-79

n-헥산, h GOST 2603-79

과산화수소, 30% 수용액 GOST 10929-77

이소프로필 알코올, 화학적으로 순수한 TU 6-09-402-75

황산, 화학적으로 순수한 GOST 4203-77

염산(염산), 화학적으로 순수한 GOST 3118-77

메틸 알코올, 화학적으로 순수한 GOST

화학적으로 순수한 수산화나트륨, 25% 수용액 GOST 4323-77

황산나트륨 무수, 화학적으로 순수한 GOST 1277-81

질산은, 화학적으로 순수한 GOST 1277-81

2-페녹시메탄올, h TU 6-09-3688-76

크로마톤 N-AW-DMCS(0.16 - 0.20mm)

5% SE-30, 헤마폴, 체코

Chromaton N-AW-DMCS(0.16 - 0.20mm) 1.5

OV-17 + 1.95% QF-1, 헤마폴, 체코

HPTLC(소련)용 플레이트

기록 "Kieselgel 60 F-254"(독일)

"실루폴" 체코 공화국 기록

종이 필터 "백색 테이프", 무회 및 헥산 TU 6-09-2678-77로 사전 세척

2.3. 칼붙이, 장비, 기구

액체 크로마토그래프 밀리크롬

UV 검출기로

크로마토그래피 강철 기둥,

길이 64mm, 내경 2mm,

Silasorb 600 충전, 입자 크기 5 µm

가스 크로마토그래프 시리즈 "색상" 또는

유사, 일정한 감지기 장착

한계가 있는 재조합율(RPR)

lindane 4 x 10g/cu에 의한 검출. 센티미터

크로마토그래피 유리 컬럼, 길이

1 또는 2 m, 내경 2 - 3 mm

마이크로 주사기 유형 MSH-10, 용량 10µl TU 5E2-833-024

셰이킹 타입 AVU-6s TU 64-1-2851-78용 장치

수욕 TU 64-1-2850-76

분석 저울 유형 VLA-200 GOST 34104-80E

크로마토그래피 챔버 GOST 10565-74

워터 제트 펌프 GOST 10696-75

수은 석영 조사기 유형 OKN-11 TU 64-1-1618-77

스프레이 건 유리 GOST 10391-74

회전식 진공 증발기 IR-1M

또는 유사 TU 25-11-917-76

압축기 장치 TU 64-1-2985-78

건조 캐비닛 TU 64-1-1411-76E

분할 깔때기 GOST 3613-75

100ml 용량의 부피 플라스크 GOST 1770-74

측정 실린더, 용량 10, 50ml GOST 1770-74E

단면이 얇은 배 모양의 플라스크,

100ml 용량의 GOST 10394-72

100ml 용량의 플라스크 원추형 GOST 22524-77

GOST 25336-82E로 측정된 원심분리기 시험관

0.1, 1, 2, 5 및 10ml 용량의 피펫 GOST 20292-74

화학 깔때기, 원추형, 직경

34 - 40mm GOST 25336-82E

2.4. 샘플 선택

샘플 채취, 보관 및 준비는 다음 규정에 따라 수행됩니다.

21.08.79의 N 2051-79에 대해 승인된 "미량의 살충제 측정을 위한 농산물, 식품 및 환경 물체 샘플링에 대한 통합 규칙"

채취한 샘플은 최대 5일 동안 냉장고에 보관할 수 있습니다. 분석 전에 물(현탁액이 있는 경우)을 느슨한 종이 필터를 통해 여과합니다.

2.5. 정의를 위한 준비

2.5.1. HPLC 방법

2.5.1.1. HPLC를 위한 이동상 준비

용량 100ml의 메스플라스크에 이소포파놀 5ml 및 메탄올 5ml를 피펫으로 넣고 헥산으로 표시선까지 채우고 혼합하고 여과한다.

2.5.1.2. 컬럼 컨디셔닝

헥산-메탄올-이소프로판올(90:5:5, v/v)로 HPLC 컬럼을 30분 동안 헹굽니다. 100 µl/min의 용매 공급 속도로.

2.5.2. GLC 방식. 컬럼 준비 및 컨디셔닝

완성된 패킹(Chromaton N-AW-DMCS의 5% SE-30)을 유리 컬럼에 붓고 진공 하에 압축하고 컬럼을 검출기에 연결하지 않고 크로마토그래프 온도 조절 장치에 설치하고 10 - 12 정오 동안 250 -C의 온도

2.5.3. TLC 방식

2.5.3.1. 현상 시약의 준비

2.5.3.1.1. 현상제 1호

질산은 1g을 증류수 1ml에 녹이고 2-페녹시메탄올 10ml, 아세톤 190ml, 과산화수소 1-2방울을 가하고 교반하여 암색 유리병에 옮긴다.

2.5.3.2.2. 현상시약 N 2

100ml 메스플라스크에 질산은 0.5g을 가하여 증류수 5ml에 녹이고 25% 암모니아수 10ml를 가하고 아세톤을 가하여 100ml로 하고 혼합하여 어두운 유리병에 옮긴다.

2.5.3.2. TLC를 위한 이동상 준비

용량 100ml의 메스플라스크에 아세톤 20ml를 넣고 헥산을 표시선까지 넣고 섞는다. 혼합물을 30분 안에 6 - 8mm 이하의 층으로 크로마토그래피 챔버에 붓습니다. 크로마토그래피를 시작하기 전에.

2.5.4. 표준 용액의 준비

100 μg/mL 클로마존 스톡 표준 용액은 100 mL 부피 플라스크에 헥산에 99.8% AI를 포함하는 제제 0.010 g을 용해하여 준비합니다. 용액은 한 달 동안 냉장고에 보관됩니다.

0.4 농도의 작업 표준 용액; 1.0; 2.0; 4.0; 10.0; 20 및 40.0 μg/ml는 헥산으로 적절히 연속 희석하여 클로마존 스톡 표준 용액에서 준비합니다.

작업 솔루션은 한 달 이상 냉장고에 보관되지 않습니다.

2.5.5. 교정 그래프의 구성

2.5.5.1. 보정 곡선 A(단락 2.7.1, HPLC에 따른 측정)

보정 그래프를 작성하기 위해 4.0 농도의 클로마존 작업 표준 용액 5μl를 크로마토그래프 주입기에 주입합니다. 10.0; 20.0 및 40μg/ml.

2.5.5.2. 보정 곡선 B(단락 2.7.2, GLC에 따른 측정)

보정 그래프를 작성하기 위해 0.4 농도의 클로마존 작업 표준 용액 5μl를 크로마토그래프 증발기에 주입합니다. 1.0; 2.0; 4.0 및 10.0.

최소 5번의 병렬 측정을 수행하십시오. 각 농도에 대한 크로마토그래피 피크의 평균 높이를 찾으십시오. μg/ml의 용액 내 클로마존 농도에 대한 크로마토그래피 피크의 높이(mm) 의존성에 대한 보정 그래프(A 또는 B)를 작성하십시오.

2.6. 정의 설명

분석대상 물시료 100ml를 250ml 용량의 분액깔대기에 넣고 25% 수산화나트륨 수용액 10ml를 가하여 혼합하고 n-헥산 20ml를 가한다. 깔때기를 3분간 흔든 후 상분리 후 헥산층을 100ml 용량의 배모양플라스크에 붓고 주름진 여과지의 원추깔대기에 넣은 무수황산나트륨층에 통과시킨다. n-헥산 20ml를 사용하여 수용액 시료로부터 약물의 추출을 2회 더 반복한다. 결합된 헥산 추출물은 거의 건조될 때까지 40 -C의 온도에서 회전식 진공 증발기에서 증발되고, 잔류물은 특별한 순도의 공기 또는 질소 기류로 날아갑니다. 건조 잔류물을 0.1(HPLC, TLC) 또는 0.25ml(GLC) n-헥산에 용해하고 크로마토그래피 방법 중 하나로 분석합니다.

2.7. 크로마토그래피 조건

자외선 검출기가 있는 액체 크로마토그래프 Milichrom(러시아).

강철 기둥 길이 64mm, 내경 2mm,

Silasorb 600, 입자 크기 5 미크론으로 채워짐.

컬럼 온도: 실온.

이동상: 헥산-이소프로판올-메탄올(90:5:5, v/v).

용리액 유속: 100µl/min.

작동 파장: 240nm.

감도: 0.4 단위 규모에 대한 흡수.

주입량: 5μl.

Clomazone 출구 시간: 약 6분

선형 감지 범위: 20 - 200ng.

40 µg/mL 표준 용액보다 더 큰 피크를 생성하는 샘플은 HPLC 이동상으로 희석됩니다.

일정한 이온 재결합 속도의 검출기가 있는 가스 크로마토그래프 "Tsvet-570".

5% SE-30(0.16 - 0.20mm)이 포함된 Chromaton N-AW-DMCS로 채워진 유리 기둥 길이 1m, 내경 3mm.

전위계의 작동 규모는 64 x 10 10 Ohm입니다.

레코더 테이프 속도 200mm/h.

컬럼 온도 조절기 온도 - 190 -С

검출기 - 300 -C

증발기 - 220 -C

운반 가스(질소)의 속도 - 60ml/min.

주입된 샘플의 부피는 5 μl입니다.

clomazone의 종료 시간은 2.5분입니다.

선형 감지 범위: 2 - 50ng.

10 µg/mL 표준 용액보다 큰 피크를 생성하는 샘플은 헥산으로 희석합니다.

시료에 머무름 시간이 가까운 감마-HCCH가 존재할 때 클로마존 식별 정확도를 높이기 위해 농축 황산 처리를 통해 시료에서 클로마존을 제거합니다. 샘플을 재분석하면 1차 크로마토그래피 신호에 대한 클로마존의 기여도를 설정할 수 있습니다.

2.6항에 따라 정량적으로 얻은 플라스크의 헥산 용액

(또는 이의 분취량)은 크로마토그래피 플레이트 "Silufol", "Kieselgel 60F-254" 또는 "HPTLC용 플레이트"에 적용됩니다. 근처에서 표준 용액은 clomazone 1, 2, 5 및 10 μg의 함량에 해당하는 부피로 적용됩니다. 플레이트를 n-헥산-아세톤(4:1, v/v)의 혼합물을 포함하는 크로마토그래피 챔버에 놓습니다. 크로마토그램 현상 후 플레이트를 챔버에서 제거하고 용매가 증발할 때까지 통풍 상태에 둔 다음 현상 시약 중 하나로 처리하고 자외선 램프 아래에 5분 동안 둡니다. "Silufol", "HPTLC용 플레이트" 및 "Kieselgel 60F-254" 플레이트에서 약물의 국소화 영역은 각각 Rf 값이 0.35, 0.85 및 0.43인 회색 갈색 반점으로 나타납니다. TLC로 clomazone을 결정하려면 "Alugram" 및 "Polygram"(독일 제조) 플레이트를 사용할 수 있습니다. 이 플레이트에서 clomazone의 Rf 값은 각각 0.37 및 0.38입니다.

3. 안전 요구 사항

유기 용제, 독성 물질, 전기 히터로 작업할 때는 일반적으로 인정되는 안전 규칙을 따라야 합니다.

4. 측정 오차 제어

측정의 오류 및 재현성에 대한 작동 제어는 MI 2335-95의 권장 사항에 따라 수행됩니다. GSI "정량 화학 분석 결과의 내부 품질 관리".

5. 개발자

Yudina T.V., Fedorova N.E. (F.F. Erisman의 이름을 따서 명명된 FNTSG).

다비육 E.I. (UkrNIIGINTOX, 키예프); Kisenko M.A., Demchenko V.F. (키예프의 과학 아카데미 및 의과 아카데미의 직업 의학 연구소).

HPLC 방법은 화학, 석유 화학, 생물학, 생명 공학, 의약, 식품 가공, 환경 보호, 의약품 생산 및 기타 여러 분야에서 널리 사용됩니다.

HPLC는 분석 또는 분리된 물질의 분리 메커니즘에 따라 흡착, 분포, 이온 교환, 배제, 리간드 교환 등으로 구분됩니다.

순상 HPLC

고정상은 이동상보다 극성이 높으므로 비극성 용매가 용리액 조성에서 우세합니다.

헥산:이소프로판올 = 95:5(저극성 물질의 경우)
클로로포름:메탄올 = 95:5(중간 극성 물질의 경우)
클로로포름:메탄올 = 80:20(극성 물질의 경우)

역상 HPLC

역상 HPLC의 일반적인 용리액은 다음과 같습니다.

아세토니트릴: 물
메탄올: 물
이소프로판올: 물

HPLC용 매트릭스

매트릭스의 주요 특성:

입자 크기(μm)
내부 기공 크기(Å, nm).

HPLC용 실리카겔 얻기:

폴리규산의 미소구체 형성;
실리카겔 입자 건조;
공기 분리.

흡착제 입자:

일반(구형): 더 높은 압력 저항, 더 높은 비용;
비구형: 낮은 압력 저항.

고정상 이식편

순상 HPLC:

프로필니트릴(니트릴)로 그래프트된 고정상;
프로필아민 그래프팅(아민)이 있는 고정상.

역상 HPLC:

알킬 그래프트가 있는 고정상;
알킬실릴 그래프트가 있는 고정상.

HPLC 검출기

자외선
다이오드 어레이
형광등
전기화학
굴절계
대량 선택

연결

위키미디어 재단. 2010년 .

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HPLC- 고성능 액체 크로마토 그래피 ... 러시아어 약어 사전

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 복잡한 물질 혼합물을 분리하는 효과적인 방법 중 하나로 분석 화학과 화학 기술 모두에서 널리 사용됩니다. 크로마토 그래피 분리의 기본은 참여입니다 ... Wikipedia

서적

실용적인 고성능 액체 크로마토그래피, Veronica R. Mayer. 현대적인 방법과 장비로 확장된 제5판을 독자 여러분께 선보입니다. 이 책에서 많은 부분이 개선되었고 많은 참고 문헌이 추가되었습니다. 본문의 장소는...

(OFS 42-0096-09)

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 이동상(MP)이 액체인 컬럼 크로마토그래피 방법입니다.

지지되지 않는 물질로 채워진 크로마토그래피 컬럼을 통과하는 뼈

시각적 단계(흡착제). HPLC 컬럼은 컬럼 입구에서 높은 수압을 특징으로 하므로 HPLC는 때때로

"고압 액체 크로마토그래피"라고 합니다.

물질 분리 메커니즘에 따라 다음이 구별됩니다.

일반 HPLC 옵션: 흡착, 분포, 이온 교환,

독점, 키랄 등

흡착 크로마토그래피에서 물질의 분리는 증가함에 따라 흡착 및 탈착되는 능력이 다르기 때문에 발생합니다.

예를 들어 실리카겔과 같은 현상된 표면이 있는 흡착제의 표면.

Partition HPLC에서는 부동액과 부동액 사이에서 분리하고자 하는 물질의 분포계수의 차이로 인해 분리가 일어납니다.

(보통 고정된 캐리어의 표면에 화학적으로 접목됨)

이동상.

극성에 따라 PF와 NF HPLC는 순상과 ob-

위상 회전.

순상은 크로마토그래피의 변형이라고 합니다.

극성 흡착제(예: 실리카겔 또는

꼬인 NH2 - 또는 CN-기) 및 비극성 PF(예: 서로 다른 헥산

개인 보충제). 크로마토그래피의 역상 변형에서,

비극성 화학적으로 변형된 흡착제를 사용하십시오(예:

비극성 알킬 라디칼 C18 ) 및 극성 이동상(예:

메탄올, 아세토니트릴).

이온 교환 크로마토그래피에서, 혼합물의 물질 분자, 해리

용액에서 양이온과 음이온으로 이동하면서 분리됩니다.

흡착제(양이온 교환기 또는 음이온 교환기)는 이온과의 교환 비율이 다르기 때문에

흡착제의 mi 그룹.

제외(체, 겔-침투, 겔-여과)

물질의 크로마토그래피 분자는 고정상의 기공으로 침투하는 능력이 다르기 때문에 크기에 따라 분리됩니다. 동시에 최초의

고정상의 최소 기공으로 침투할 수 있는 가장 큰 분자(가장 높은 분자량)가 컬럼에서 나오고,

분자 크기가 작은 물질이 가장 늦게 나옵니다.

종종 분리는 하나가 아니라 여러 메커니즘에 의해 동시에 진행됩니다.

HPLC 방법은 모든 부정의 품질을 제어하는 데 사용할 수 있습니다.

유사한 분석. 분석을 위해 액체 크로마토그래피와 같은 적절한 기기가 사용됩니다.

액체 크로마토그래프의 구성은 일반적으로 다음과 같은 기본 요소를 포함합니다.

노드:

– 이동상이 있는 용기(또는 용기를 포함하는 PF 준비 단위)

이동상의 일부인 개별 용매로 sti

zy) 및 PF 탈기 시스템;

– 펌핑 시스템;

– 이동상 혼합기(필요한 경우);

– 샘플 주입 시스템(인젝터);

– 크로마토그래피 컬럼(온도 조절 장치에 설치 가능);

- 탐지기;

– 데이터 수집 및 처리 시스템.

펌핑 시스템

펌프는 주어진 일정한 속도로 PF를 컬럼에 공급합니다. 이동상의 조성은 일정하거나 가변적일 수 있습니다.

분석 중. 첫 번째 경우 프로세스를 등용매라고 하며,

그리고 두 번째 - 그라디언트. 때때로 펌핑 시스템 앞에 설치

이동상 필터링을 위한 0.45 µm의 기공 직경을 가진 필터. 현대의

액체 크로마토그래프의 가변 펌핑 시스템은 컴퓨터로 제어되는 하나 이상의 펌프로 구성됩니다. 이를 통해 다음을 변경할 수 있습니다.

gradient elution이 있는 특정 프로그램에 따라 PF가 됩니다. 중소기업

혼합기에서 PF 성분의 혼합은 낮은 압력에서도 발생할 수 있습니다.

이온(펌프 전) 및 고압(펌프 후). 믹서는 PF 준비 및 등용매 용출에 사용할 수 있습니다.

그러나 구성 요소의 더 정확한 비율은 예비

등용매 공정을 위한 PF 성분의 혼합. 분석용 HPLC 펌프를 사용하면 최대 50 MPa의 컬럼 입구 압력에서 0.1 ~ 10 ml/min 범위의 컬럼으로 PF의 일정한 유속을 유지할 수 있습니다. 그러나 이 값은 다음을 초과하지 않는 것이 좋습니다.

샬로 20MPa. 특수 댐핑으로 압력 맥동 최소화

펌프 설계에 포함된 페룰 시스템. 작업 부품에-

펌프는 내식성 재료로 만들어져 PF 구성에 공격적인 구성 요소를 사용할 수 있습니다.

수도꼭지

설계상 믹서는 정적이거나 동적일 수 있습니다.

마이크

믹서에서 단일 이동상이 형성됩니다.

필요한 혼합물이 미리 준비되지 않은 경우 펌프에서 공급하는 특정 용매. 용매 혼합은 일반적으로 자발적으로 발생하지만 강제 혼합 시스템이 때때로 사용됩니다.

재봉.

인젝터

인젝터는 다음에서 샘플을 도입하기 위해 보편적일 수 있습니다.

1 µl ~ 2 ml 또는 특정 부피의 샘플 주입용 개별

에마. 두 가지 유형의 인젝터 모두 자동("자동 주입기" 또는 "자동 샘플러")일 수 있습니다. 시료(용액)를 입력하기 위한 인젝터가 위치하지 않습니다.

크로마토그래피 컬럼 바로 앞에 있습니다. 인젝터의 설계는 PF 흐름의 방향을 변경하고 샘플을 특정 부피(보통 10 ~ 100μl)의 루프에 미리 도입하는 것을 가능하게 합니다.

이 볼륨은 루프 레이블에 표시됩니다. 인젝터의 설계로 루프를 교체할 수 있습니다. 분석된 솔루션을 non-av-av-

토마틱 인젝터는 상당한 양의 수동 마이크로 주사기를 사용합니다.

루프의 볼륨을 크게 초과합니다. 주입된 용액의 과량,

루프에서 제거되고 정확하고 항상 동일한 양의 샘플이 컬럼에 주입됩니다. 루프를 수동으로 불완전하게 채우면 정확도가 떨어집니다.

투여 정확도 및 재현성, 결과적으로 정확도 저하

크로마토그래피 분석의 재현성.

크로마토그래피 컬럼

크로마토그래피 컬럼은 일반적으로 스테인리스 스틸, 유리 또는 플라스틱 튜브에 흡착제로 채워져 있으며 밀폐되어 있습니다.

구멍 직경이 2-5 µm인 필터가 있는 양면에. 분석의 길이

컬럼은 크로마토그래피 분리 메커니즘에 따라 5~60cm 또는 그 이상일 수 있습니다(일반적으로

10-25 cm), 내경 - 2 ~ 10mm(보통 4.6mm). 내경이 2mm 미만인 컬럼은 마이크로 컬럼 크롬에 사용됩니다.

지형도. 내부 직경이 있는 모세관 컬럼도 사용됩니다.

럼 약 0.3-0.7 mm. 분취 크로마토그래피용 컬럼은 내부 직경이 최대 50mm 이상입니다.

분석 컬럼 전에 짧은 케이블을 설치할 수 있습니다.

다양한 보조 기능을 수행하는 컬럼(pre-columns)

(더 자주 - 분석 컬럼의 보호). 일반적으로 분석은 다음에서 수행됩니다.

그러나 실온에서 분리 효율을 높이고

분석 시간 단축, 온도 조절 장치 사용 가능

컬럼은 60C를 초과하지 않는 온도에서 피로합니다. 더 높은 온도에서는 흡착제의 분해와 PF 조성의 변화가 가능합니다.

정지상(흡착제)

일반적으로 사용되는 흡착제는 다음과 같습니다.

1. 실리카겔, 알루미나, 다공성 흑연은 일반

소상 크로마토그래피. 이 경우 고정 메커니즘

차 - 일반적으로 흡착;

2. 산성 또는 염기성 그룹이 있는 수지 또는 폴리머. 범위 - 이온 교환 크로마토그래피;

3. 다공성 실리카 겔 또는 중합체(크기 배제 크로마토그래피);

4. 화학적으로 변형된 흡착제

zami), 실리카겔을 기준으로 가장 자주 준비됩니다. 대부분의 경우 유지 메커니즘은 모바일

노아와 정지 단계;

5. 예를 들어, 화학적으로 변형된 키랄 흡착제,

수성 셀룰로오스 및 아밀로스, 단백질 및 펩티드, 시클로덱스트린,

거울상 이성질체를 분리하는 데 사용(키랄 크로마토그래피)

결합상 흡착제는 다양한 정도의 화학적 성질을 가질 수 있습니다.

체스키 수정. 흡착제 입자는 구형 또는 비구형일 수 있습니다.

규칙적인 모양과 다양한 다공성.

가장 일반적으로 사용되는 결합상은 다음과 같습니다.

– 옥틸기(흡착제 옥틸실란 또는 C8);

– 옥타데실기(흡착제 옥타데실실란

(ODS) 또는 C18);

– 페닐기(흡착제 페닐실란);

– 시아노프로필기(흡착제 CN);

– 아미노프로필기(NH2흡착제);

– 디올 그룹(흡착 디올).

대부분의 경우 분석은 다음의 비극성 결합 상에서 수행됩니다.

C18 흡착제를 사용한 역상 모드.

어떤 경우에는 normal을 사용하는 것이 더 적절합니다.

상 크로마토그래피. 이 경우 실리카겔 또는 극성 결합상("CN", "NH2", "diol")이 비극성 용질과 함께 사용됩니다.

결합상 흡착제는 제조업체가 달리 지정하지 않는 한 pH 2.0에서 8.0 사이에서 화학적으로 안정합니다.

흡착제 입자는 구형 또는 불규칙한 모양과 다양한 다공성을 가질 수 있습니다. 분석용 HPLC에서 흡착제의 입자 크기는 일반적으로 3~10μm이고 분취용 HPLC에서는 최대 50μm 이상입니다.

모놀리식 흡착제도 사용됩니다.

높은 분리 효율은 흡착제 입자의 높은 표면적(현미경 검사 결과)에 의해 제공됩니다.

기공의 존재), 흡착제 조성의 균일성 및 조밀하고 균일한 패킹.

감지기

다양한 탐지 방법이 사용됩니다. 일반적으로 크로마토그래피 컬럼 후 성분이 용해된 PF

ki는 검출기 셀에 들어가며 여기에서 하나 또는 다른 특성이 연속적으로 측정됩니다(스펙트럼의 UV 또는 가시광선 영역에서의 흡수, 형광,

굴절률, 전기 전도도 등). 결과 크로마토그램은 일부 물리적

또는 제 시간에 PF의 물리화학적 매개변수.

가장 일반적인 것은 분광 광도계

검출기(다이오드-매트릭스 포함), 광학적 변화를 등록

자외선, 가시광선 및 종종 근적외선의 밀도

190에서 800 또는 900 nm의 스펙트럼의 다른 영역. 이 경우의 크로마토그램

차는 시간에 따른 PF의 광학 밀도의 의존성입니다.

전통적으로 사용되는 분광광도계 검출기는

작동 범위의 모든 파장에서 감지 가능

존. 전도를 허용하는 다중파 검출기도 사용됩니다.

여러 파장에서 동시에 감지를 수행합니다.

다이오드 어레이 검출기의 도움으로 한 번에 여러 파장의 검출을 수행할 수 있을 뿐만 아니라 거의 즉시 수행할 수 있습니다.

스캐닝 없이 언제든지 PF의 광학 스펙트럼을 얻을 수 있으므로 분리된 구성 요소의 정성 분석이 크게 간소화됩니다.

구성 요소.

형광 검출기의 감도는 분광 광도계의 감도보다 약 1000배 높습니다. 이 경우 분석 물질 자체가 형광을 내지 않는 경우 자체 형광 또는 해당 유도체의 형광이 사용됩니다. 현대의

교체 가능한 형광 검출기는 크로마토그래피를 얻을 수 있을 뿐만 아니라

그램뿐만 아니라 분석의 여기 및 형광 스펙트럼을 기록합니다.

zyable 연결.

굴절계 검출기는 스펙트럼의 UV 및 가시 영역(예: 탄수화물)을 흡수하지 않는 샘플을 분석하는 데 사용됩니다.

(굴절계). 이러한 검출기의 단점은 (분광광도계 검출기에 비해) 감도가 낮고 신호 강도의 상당한 온도 의존성입니다(검출기는 온도 조절이 되어야 함).

전기화학적 검출기도 사용됩니다(전도도 측정

하늘, 전류 측정 등), 질량 분석 및 푸리에-IR

검출기, 광산란 검출기, 방사능 및 기타

이동상

에 다양한 용매(개별 및 이들의 혼합물 모두)를 PF로 사용할 수 있습니다.

에 정상 위상크로마토그래피는 일반적으로 액체 탄소를 사용합니다.

탄화수소(헥산, 시클로헥산, 헵탄) 및 기타 비교적 비극성

극성 유기 화합물이 소량 첨가된 용매,

PF의 용출 강도를 조절합니다.

역상 크로마토그래피에서 PF의 조성은 극성 또는

유기 용매(보통 아세토니트릴 및 메탄올) 및 물. 최적화를 위해

분리 연구는 종종 특정 기호가 있는 수용액을 사용합니다.

pH 값, 특히 완충액. 무기 첨가제를 사용

calic 및 유기산, 염기 및 염 및 기타 화합물(on-

예를 들어, 거울상 이성질체를 비키랄로 분리하기 위한 키랄 개질제

nom 흡착제).

pH 값의 제어는 유기 용매와의 혼합물이 아닌 수성 성분에 대해 별도로 수행해야 합니다.

PF는 하나의 용매로 구성될 수 있으며 필요한 경우 종종 2개로 구성될 수 있습니다.

희미함 - 세 개 이상에서. PF의 조성은 구성 용매의 부피비로 표시됩니다. 어떤 경우에는 질량

특별히 규정해야 하는 비율.

UV 분광광도계 검출기를 사용할 때 PF는 검출을 위해 선택한 파장에서 뚜렷한 흡수를 나타내지 않아야 합니다. 결정할 때 투명도 또는 광학 밀도의 한계

특정 제조업체의 용매의 지정된 파장이 종종 표시됩니다.

패키지에 있습니다.

크로마토그래피 분석은 PF의 순도에 큰 영향을 받으므로 생성된 용매를 사용하는 것이 바람직합니다.

ny는 특히 액체 크로마토그래피(물 포함)용입니다.

PF 및 분석된 용액에는 용해되지 않은 물질이 포함되어서는 안 됩니다.

입자 및 가스 거품. 실험실에서 얻은 물

물 유기 용매와 미리 혼합된 수용액

분석된 용액뿐만 아니라 용매는 미세 여과 및 탈기를 거쳐야 합니다. 필터링은 일반적으로 이러한 목적으로 사용됩니다.

0.45 μm의 공극 크기를 갖는 이 용매 또는 용액에 대해 불활성인 멤브레인 필터를 통한 진공 하에서.

데이터 수집 및 처리 시스템

현대 데이터 처리 시스템은 복합

소프트웨어가 설치된 크로마토그래프와 연결된 개인용 컴퓨터

크로노그래프를 등록하고 처리할 수 있는 소프트웨어

마토그램은 물론 크로마토그래프의 작동을 관리하고 주요

크로마토그래피 시스템의 mi 매개변수.

지정할 크로마토그래피 조건 목록

개인 논문에서 공동의 차원

컬럼, 입자 크기가 표시된 흡착제의 유형, 컬럼 온도(온도 조절이 필요한 경우), 주입된 샘플의 부피(루프 부피),

PF 상태 및 준비 방법, PF 공급 속도, 검출기 및 검출 조건, 구배 모드 설명(사용되는 경우), 크로마토그래피 시간.

이온 교환 및 이온 HPLC

이온 교환 크로마토그래피는 유기물로서 분석에 사용됩니다.

Skikh(헤테로사이클릭 염기, 아미노산, 단백질 등) 및 비 또는-

ganic(다양한 양이온 및 음이온) 화합물. 구성 요소 분리

이온 교환 크로마토그래피에서 분석된 혼합물의 성분은 분석된 물질의 이온과 이온 그룹의 가역적 상호 작용을 기반으로 합니다.

파미 흡착제. 음이온 교환기 또는 양이온 교환기가 흡착제로 사용됩니다.

너. 이러한 흡착제는 주로 폴리머 이온-

교환 수지(일반적으로 스티렌과 디비닐벤젠과 그래프트의 공중합체

이온 그룹), 또는 그래프트된 이온 교환 그룹이 있는 실리카 겔. -(CH2)3 N+ X- 기가 있는 흡착제는 음이온을 분리하는 데 사용되며 -(CH2)SO3 – H+ 기가 있는 흡착제는 양이온을 분리하는 데 사용됩니다.

일반적으로 고분자 수지는 음이온을 분리하고 전자를 분리하는 데 사용됩니다.

양이온은 변형된 실리카겔입니다.

이온 교환 크로마토그래피에서 PF로 산, 염기 및 염의 수용액이 사용됩니다. 버퍼 레이스는 일반적으로 사용됩니다.

특정 pH 값을 유지할 수 있는 솔루션. 수혼화성 유기물의 작은 첨가제를 사용하는 것도 가능합니다.

칼 용매 - 아세토니트릴, 메탄올, 에탄올, 테트라히드로푸란.

이온 크로마토그래피- 이온 교환 크로마토그래피의 변형

분석물의 이온 농도를 결정하기 위해 사용되는

전도도 검출기를 사용합니다. 고감도 작업용

PF 검출기를 통과하는 전기 전도도의 변화를 확인하려면 PF의 배경 전기 전도도가 낮아야 합니다.

이온 크로마토그래피에는 두 가지 주요 변형이 있습니다.

첫 번째는 전해액의 전기 전도도 억제에 기반합니다.

항문 사이에 위치한 두 번째 이온 교환 컬럼을 사용하여 PF

용해 컬럼 및 검출기. 이 칼럼에서는 중화가 일어납니다.

PF 및 분석된 화합물은 탈이온화에서 검출기 셀에 들어갑니다.

지로바노이 물. 검출된 이온은 유일한 이온

PF의 전도성을 보장합니다. 서프레서 컬럼의 단점은 상당히 짧은 간격으로 재생해야 한다는 것입니다.

나. 억제 컬럼은 연속 작동으로 교체할 수 있습니다.

막의 조성이 연속적으로 유지되는 막 억제제

방향으로 이동하는 재생 용액의 흐름입니다.

PF 흐름의 방향과 반대입니다.

이온 크로마토그래피의 두 번째 버전은 단일 컬럼 이온 크로마토그래피입니다.

마토그래피. 이 변형에서는 전기 전도성이 매우 낮은 PF가 사용됩니다.

수분 함량. 약한 유기 화합물은 전해질로 널리 사용됩니다.

하늘산 - 벤조산, 살리실산 또는 이소프탈산.

크기 HPLC

크기 배제 크로마토그래피(겔 크로마토그래피)는 크기에 따른 분자 분리를 기반으로 하는 특별한 버전의 HPLC입니다. 분포

정지상과 이동상 사이의 분자는 분자의 크기를 기반으로 합니다.

분자 및 부분적으로 모양과 극성에 따라 다릅니다. 분리를 위해 사용

다공성 흡착제 - 폴리머, 실리카겔, 다공성 유리 및 다당류.

흡착제의 입자 크기는 5-10 µm입니다.

다공성 유리 및 실리카겔의 장점은 PF 및 분석물 분자가 기공으로 빠르게 확산되고 다양한 조건(고온에서도)에서 안정성이 있다는 것입니다. 고분자 소르벤-

당신은 스티렌과 디비닐벤젠의 공중합체입니다(이것은 하이드로-

비극성 이동상에 사용되는 소수성 흡착제) 및

설폰화된 디비닐벤젠 또는 폴리아크릴아미드 수지에서 얻은 친수성 겔.

다공성 고정상과 분자의 두 가지 제한적인 상호작용 유형이 가능합니다. 기공의 평균 직경보다 큰 분자는 흡착제에 전혀 침투하지 않고 이동상과 함께 용출됩니다.

먼저 조이. 종류의 기공 크기보다 훨씬 작은 직경을 가진 분자

구부러진 부분이 자유롭게 침투하여 가장 오랫동안 정지 상태를 유지하고 마지막에 용출됩니다. 중간 크기의 분자는 크기에 따라 부분적으로 모양에 따라 흡착제의 기공으로 침투합니다. 그들은 서로 다른 머무름 시간으로 용리됩니다.

우리의 가장 크고 작은 분자. 크로마토그래피된 샘플의 성분 분리는 반복적인 작업의 결과로 발생합니다.

시료 성분이 흡착제의 기공으로 확산되거나 그 반대의 경우도 마찬가지입니다.

크기 배제 크로마토그래피에서 머무름을 특성화하기 위해,

PF 유량과 머무름 시간의 곱과 동일한 머무름 부피가 사용됩니다.

이동상. PF의 선택은 흡착제의 유형에 따라 다릅니다. 제외-

크로마토그래피는 일반적으로 겔 여과와 겔 크로마토그래피로 나뉩니다.

투과 크로마토그래피.

겔여과크로마토그래피법을 이용하여

친수성 흡착제에 대한 수용성 화합물. 이동상은 주어진 pH 값을 갖는 수성 완충 용액입니다.

겔 투과 크로마토그래피는 소수성을 사용합니다.

벤트 및 비극성 유기 용매(톨루엔, 디클로로메탄, 테트라-

히드로푸란). 이 방법은 난용성 화합물을 분석하는 데 사용됩니다.

물에 림.

탐지기. 크기 배제 크로마토그래피의 검출기로는 시차 굴절계 검출기 및 분광광도계 검출기(스펙트럼의 IR 영역 포함)가 사용됩니다.

점도 측정 및 유동 레이저 검출기도 사용됩니다.

굴절계 또는 기타 농도와 결합된 이러한 검출기

검출기를 통해 지속적으로 분자량을 결정할 수 있습니다.

PF의 석회.

초고성능 액체 크로마토그래피

초고성능 액체 크로마토그래피는 보다 효율적인 액체 크로마토그래피의 변형입니다.

stu는 기존 HPLC와 비교됩니다.

초고성능 액체 크로마토그래피의 특징은

입자 크기가 1.5~2 마이크론인 흡착제의 사용. 크로-

마토그래픽 칼럼은 일반적으로 길이가 50~150mm이고 1개의

최대 직경 4mm. 주입된 샘플의 부피는 1 ~ 50µl일 수 있습니다.

고전에 사용된 크로마토그래피 장비

riante HPLC, 일반적으로 이러한 유형의 크로마토그래피에 적합

초고성능 액체 크로마토그래피용으로 설계된 장비는 클래식 버전의 HPLC에서도 사용할 수 있습니다.