Kvapalinová chromatografia. Vlastnosti použitia metódy vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie v liečivách Kvapalná chromatografia podstata metódy

(hlavne intermolekulárne) na rozhraní. Ako metóda analýzy je HPLC súčasťou skupiny metód, ktorá vzhľadom na zložitosť skúmaných objektov zahŕňa predbežnú separáciu pôvodnej komplexnej zmesi na relatívne jednoduché. Výsledné jednoduché zmesi sa potom analyzujú konvenčnými fyzikálno-chemickými metódami alebo špeciálnymi metódami vyvinutými pre chromatografiu.

Metóda HPLC je široko používaná v takých oblastiach ako chémia, petrochémia, biológia, biotechnológia, medicína, potravinárstvo, ochrana životného prostredia, farmaceutická výroba a mnohé ďalšie.

Podľa mechanizmu separácie analyzovaných alebo separovaných látok sa HPLC delí na adsorpčnú, distribučnú, iónomeničovú, veľkostne vylučovaciu, ligandovú a iné.

Treba mať na pamäti, že v praktickej práci separácia často prebieha nie jeden po druhom, ale prostredníctvom niekoľkých mechanizmov súčasne. Vylučovacia separácia je teda komplikovaná adsorpčnými efektmi, adsorpčnou - distribúciou a naopak. Navyše, čím väčší je rozdiel medzi látkami vo vzorke z hľadiska stupňa ionizácie, zásaditosti alebo kyslosti, molekulovej hmotnosti, polarizovateľnosti a iných parametrov, tým väčšia je pravdepodobnosť rozdielneho separačného mechanizmu pre takéto látky.

Normálna fáza HPLC

Stacionárna fáza je polárnejšia ako mobilná, preto v zložení eluentu prevláda nepolárne rozpúšťadlo:

Hexán:izopropanol = 95:5 (pre látky s nízkou polaritou)
Chloroform:metanol = 95:5 (pre stredne polárne látky)
Chloroform: metanol = 80:20 (pre vysoko polárne látky)

HPLC na reverznej fáze

Stacionárna fáza je menej polárna ako mobilná fáza, preto je v eluente takmer vždy prítomná voda. V tomto prípade je vždy možné zabezpečiť úplné rozpustenie BAC v mobilnej fáze, takmer vždy je možné použiť UV detekciu, takmer všetky mobilné fázy sú premiešané, možno použiť gradientovú elúciu, kolónu je možné rýchlo znovu ekvilibrovať , stĺpec je možné regenerovať.

Typické eluenty pre HPLC s reverznou fázou sú:

Acetonitril: voda
Metanol: voda
Izopropanol: voda

HPLC matrice

Ako matrice v HPLC sa používajú anorganické zlúčeniny, ako je oxid kremičitý (silikagél) alebo oxid hlinitý, alebo organické polyméry, ako je polystyrén (zosieťovaný divinylbenzénom) alebo polymetakrylát. Silikagél je, samozrejme, v dnešnej dobe všeobecne akceptovaný.

Hlavné charakteristiky matice:

Veľkosť častíc (μm);
Vnútorná veľkosť pórov (Å, nm).

Príprava silikagélu pre HPLC:

Vytváranie mikrosfér kyseliny polykremičitej;
Sušenie častíc silikagélu;
Oddelenie vzduchu.

Sorpčné častice:

Pravidelné (sférické): vyššia odolnosť voči tlaku, vyššia cena;
Nesférický: nižšia odolnosť voči tlaku.

Veľkosť pórov pri HPLC je jedným z najdôležitejších parametrov. Čím menšia je veľkosť pórov, tým horšia je ich priepustnosť pre molekuly eluovaných látok. V dôsledku toho je tým horšia sorpčná kapacita sorbentov. Čím väčšie sú póry, tým je po prvé mechanická stabilita častíc sorbentu a po druhé, čím menší je sorpčný povrch, tým horšia je účinnosť.

Štepy v stacionárnej fáze

Normálna fáza HPLC:

Stacionárna fáza s vrúbľovaním propylnitrilu (nitril);
Stacionárna fáza s propylamínovým štepením (amín).

HPLC s reverznou fázou:

Stacionárna fáza s alkylovým očkovaním;
Stacionárna fáza s alkylsilylovým očkovaním.

End-capping - ochrana nevakcinovaných oblastí sorbentu dodatočným štepením "malými" molekulami. Hydrofóbna koncovka (C1, C2): vyššia selektivita, horšia zmáčavosť; hydrofilná koncovka (diol): nižšia selektivita, vyššia zmáčavosť.

HPLC detektory

UV
Diódová matica
Fluorescenčné
Elektrochemické
Refraktometrické
Hromadne selektívne

Odkazy

Nadácia Wikimedia. 2010.

Chromatografia
Deliaca chromatografia

Pozrite si, čo je „“ v iných slovníkoch:

vysokoúčinná kvapalinová chromatografia-- [A.S. Goldberg. Anglický ruský energetický slovník. 2006] Témy Energia vo všeobecnosti EN vysokoúčinná kvapalinová chromatografia HPLC ... Technická príručka prekladateľa

vysokoúčinná kvapalinová chromatografia- Termín vysokoúčinná kvapalinová chromatografia Anglický termín vysokoúčinná kvapalinová chromatografia Synonymá Skratky HPLC, HPLC Súvisiace pojmy adsorpcia, oligopeptid, proteomika, sorbent, fullerén, endohedrická, chromatografia ... ...

VYSOKO VÝKONNÁ KVAPALNÁ CHROMATOGRAFIA- kvapalinová chromatografia, aby sa zvýšila účinnosť separácie, rozpúšťadlo (eluent) pod tlakom (viac ako 3x107 Pa) sa čerpá cez kolóny naplnené sorbentom s časticami malého priemeru (do 1 μm) a perfúzna ...

KVAPALNÁ CHROMATOGRAFIA- typ chromatografie, pri ktorej je mobilnou fázou kvapalina (eluent) a stacionárna. sorbent, tv. nosič s kvapalinou alebo gélom aplikovaným na jeho povrch. Uskutočňuje sa v kolóne naplnenej sorbentom (stĺpcová chromatografia), na plochom ... ... Prírodná veda. encyklopedický slovník

Chromatografia- [κρώμα (υroma) color] proces založený na nerovnakej schopnosti jednotlivých zložiek zmesi (kvapalnej alebo plynnej) zadržiavať sa na povrchu adsorbenta tak pri ich pohlcovaní z nosného prúdu, ako aj pri ... . .. Geologická encyklopédia

Chromatografia- (z inej gréčtiny ... Wikipedia

chromatografia- Termín chromatografia Anglický termín chromatografia Synonymá Skratky Súvisiace pojmy vysokoúčinná kvapalinová chromatografia, klatrát, laboratórium na čipe, porozimetria, proteóm, proteomika, sorbent, enzým, fullerén, endohedrálny ... ... Encyklopedický slovník nanotechnológie

IÓNOVÁ VÝMENNÁ CHROMATOGRAFIA- kvapalinová chromatografia založená na rozklade. schopnosť separovaných iónov iónovej výmeny s fixirom. sorbentové ióny vznikajúce v dôsledku disociácie ionogénnych skupín posledne menovaných. Na separáciu katiónov sa používajú katexy, pre ... ... Chemická encyklopédia

HPLC- vysokoúčinná kvapalinová chromatografia ... Slovník skratiek ruského jazyka

HPLC- Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je jednou z najefektívnejších metód na separáciu zložitých zmesí látok, ktorá je široko používaná ako v analytickej chémii, tak aj v chemickej technológii. Základom chromatografickej separácie je participácia ... Wikipedia

knihy

Praktická vysokoúčinná kvapalinová chromatografia, Veronica R. Mayer. Čitateľovi predstavujeme 5. vydanie knihy, ktorá je rozšírená o moderné metódy a zariadenia. V knihe sa veľa zlepšilo a pribudlo veľké množstvo odkazov. Tie miesta v texte, kde...

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je technika stĺpcovej chromatografie, pri ktorej je mobilná fáza (PF) kvapalina, ktorá sa pohybuje cez chromatografickú kolónu naplnenú stacionárnou fázou (sorbent). HPLC kolóny majú vysoké hydraulické tlaky na vstupe do kolóny, a preto sa HPLC niekedy označuje ako „vysokotlaková kvapalinová chromatografia“.

V závislosti od mechanizmu separácie látok sa rozlišujú tieto možnosti HPLC: adsorpcia, distribúcia, iónová výmena, veľkostne vylučovacia, chirálna atď.

Pri adsorpčnej chromatografii dochádza k separácii látok v dôsledku ich rozdielnej schopnosti adsorbovať a desorbovať z povrchu adsorbenta s rozvinutým povrchom, napríklad silikagélu.

Pri distribučnej HPLC dochádza k separácii v dôsledku rozdielu v distribučných koeficientoch látok, ktoré sa majú separovať, medzi stacionárnou (zvyčajne chemicky navrúbľovanou na povrch stacionárneho nosiča) a mobilnou fázou.

Podľa polarity PP a NF sa HPLC delí na normálnu fázu a reverznú fázu.

Chromatografia na normálnej fáze je variant chromatografie, ktorý využíva polárny sorbent (napríklad silikagél alebo silikagél naočkovaný skupinami NH2 alebo CN) a nepolárny PP (napríklad hexán s rôznymi prísadami). Chromatografia na reverznej fáze využíva nepolárne chemicky modifikované sorbenty (napríklad nepolárny C18 alkylový radikál) a polárne mobilné fázy (napríklad metanol, acetonitril).

Pri iónovo-výmennej chromatografii sa molekuly látok zmesi, disociované v roztoku na katióny a anióny, pri pohybe cez sorbent (katión alebo anión) oddeľujú v dôsledku ich rôznych výmenných rýchlostí s iónovými skupinami sorbentu.

Pri veľkostnej vylučovacej (sietová, gélová permeácia, gélová filtrácia) chromatografii sa molekuly látok oddeľujú podľa veľkosti v dôsledku ich rozdielnej schopnosti prenikať do pórov stacionárnej fázy. V tomto prípade kolónu opúšťajú ako prvé najväčšie molekuly (s najvyššou molekulovou hmotnosťou), schopné preniknúť do minimálneho počtu pórov stacionárnej fázy a ako posledné opúšťajú látky s malou molekulovou hmotnosťou.

separácia často neprebieha jeden po druhom, ale prostredníctvom niekoľkých mechanizmov súčasne.

HPLC možno použiť na kontrolu kvality akéhokoľvek analytu, ktorý nie je plynný. Na analýzu použite vhodné prístroje - kvapalinové chromatografy.

Zloženie kvapalinového chromatografu zvyčajne zahŕňa tieto hlavné zložky:

- jednotka na prípravu PF vrátane nádoby s mobilnou fázou (alebo nádob s jednotlivými rozpúšťadlami, ktoré sú súčasťou mobilnej fázy) a odplyňovacieho systému PF;

- čerpací systém;

- mixér mobilnej fázy (ak je to potrebné);

- systém vstrekovania vzorky (injektor);

- chromatografická kolóna (môže byť inštalovaná v termostate);

- detektor;

- systém zberu a spracovania údajov.

Čerpací systém

Čerpadlá zabezpečujú prívod PF do kolóny pri danej konštantnej rýchlosti. Zloženie mobilnej fázy môže byť konštantné alebo sa môže počas analýzy meniť. V prvom prípade sa proces nazýva izokratický av druhom prípade gradient. Na filtrovanie mobilnej fázy sa niekedy pred čerpací systém inštalujú filtre s priemerom pórov 0,45 μm. Moderný čerpací systém kvapalinového chromatografu pozostáva z jedného alebo viacerých čerpadiel riadených počítačom. To umožňuje meniť zloženie IF podľa určitého programu počas gradientovej elúcie. Miešanie zložiek PF v mixéri môže prebiehať pri nízkom tlaku (pred čerpadlami) aj pri vysokom tlaku (za čerpadlami). Miešač je možné použiť na prípravu PP a na izokratickú elúciu, avšak presnejší pomer zložiek sa dosiahne predmiešaním zložiek PP pre izokratický proces. Čerpadlá pre analytickú HPLC umožňujú udržiavať konštantný prietok PP do kolóny v rozsahu od 0,1 do 10 ml/min pri tlaku na vstupe kolóny do 50 MPa. Je však vhodné, aby táto hodnota nepresiahla 20 MPa. Tlakové pulzácie sú minimalizované špeciálnymi tlmiacimi systémami, ktoré sú súčasťou konštrukcie čerpadla. Pracovné časti čerpadiel sú vyrobené z materiálov odolných voči korózii, čo umožňuje použitie agresívnych komponentov v zložení PF.

"Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia prírodných a odpadových vôd znečisťujúcich látok"

Úvod

Kapitola 1. Základné pojmy a klasifikácia metód kvapalinovej chromatografie

1.1 Prístroj na kvapalinovú chromatografiu

Kapitola 2. Podstata HPLC

2.1 Aplikácia

Kapitola 3. Príklady použitia HPLC pri analýze objektov životného prostredia

Kapitola 4. Zariadenie pre HPLC

Literatúra

Aplikácia

Úvod

Chromatografické metódy sú často nevyhnutné na identifikáciu a kvantifikáciu organických látok s podobnou štruktúrou. Súčasne najpoužívanejšie na rutinnú analýzu látok znečisťujúcich životné prostredie sú plynová a vysokoúčinná kvapalinová chromatografia. Plynovochromatografická analýza organických polutantov v pitnej a odpadovej vode bola najskôr založená na použití náplňových kolón, neskôr sa rozšírili aj kremenné kapilárne kolóny. Vnútorný priemer kapilárnych kolón je zvyčajne 0,20-0,75 mm, dĺžka je 30-105 m Optimálne výsledky pri analýze kontaminantov vo vode sa dosahujú najčastejšie pri použití kapilárnych kolón s rôznou hrúbkou filmu z metylfenylsilikónov obsahujúcich fenylové skupiny 5 a 50%... Systém zavádzania vzorky sa často stáva zraniteľným miestom v chromatografických technikách využívajúcich kapilárne kolóny. Systémy zavádzania vzoriek možno rozdeliť do dvoch skupín: univerzálne a selektívne. Všestranné aplikácie zahŕňajú splitové a splitless vstrekovacie systémy, vstrekovanie do „studenej“ kolóny a teplotne programované odparovanie. Pri selektívnom vstrekovaní sa používa fúkanie so stredným zachytávaním, analýza headspace atď. Pri použití univerzálnych vstrekovacích systémov sa do kolóny privádza celá vzorka, pri selektívnom vstrekovaní sa vstrekuje len určitá časť. Výsledky získané selektívnym vstrekovaním sú oveľa presnejšie, pretože frakcia vstupujúca do kolóny obsahuje iba prchavé látky a technika môže byť plne automatizovaná.

Plynovochromatografické detektory používané pri monitoringu škodlivín sa často delia na univerzálne detektory, ktoré reagujú na každú zložku v mobilnej fáze, a selektívne detektory, ktoré reagujú na prítomnosť určitej skupiny látok s podobnými chemickými vlastnosťami v mobilnej fáze. Medzi univerzálne patrí plameňová ionizácia, atómová emisia, hmotnostné spektrometrické detektory a infračervená spektrometria. Selektívne detektory používané pri analýze vody sú elektrónový záchyt (selektívny pre látky obsahujúce atómy halogénu), termoiónový (selektívny pre zlúčeniny obsahujúce dusík a fosfor), fotoionizačný (selektívny pre aromatické uhľovodíky), detektor elektrolytickej vodivosti (selektívny pre zlúčeniny, obsahujúci atómy halogénov síry a dusíka). Minimálne zistiteľné množstvá látok sú od nanogramov po pikogramy za sekundu.

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia(HPLC) je ideálna metóda na stanovenie veľkého množstva tepelne labilných zlúčenín, ktoré nie je možné analyzovať plynovou chromatografiou. Moderné agrochemikálie, vrátane metylkarbonátov a organofosfátových insekticídov a iných neprchavých látok, sú často predmetom analýzy kvapalinovou chromatografiou. Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia si získava na popularite medzi inými metódami používanými pri monitorovaní životného prostredia, aj preto, že má dobré vyhliadky v oblasti automatizácie prípravy vzoriek.

KAPITOLA 1. ZÁKLADNÉ POJMY A KLASIFIKÁCIA METÓD KVAPALINOVEJ CHROMATOGRAFIE

Kvapalinová chromatografia je rozdelená do niekoľkých tried v závislosti od typu stacionárnej fázy. Jednoduchý hardvérový dizajn papierovej a tenkovrstvovej chromatografie viedol k širokému použitiu týchto metód v analytickej praxi. Veľké možnosti kvapalinovej stĺpcovej chromatografie však podnietili zlepšenie vybavenia pre túto klasickú metódu a viedli k rýchlemu zavedeniu HPLC. Prechod eluentu cez kolónu pod vysokým tlakom umožnil dramaticky zvýšiť rýchlosť analýzy a výrazne zvýšiť účinnosť separácie vďaka použitiu jemne dispergovaného sorbentu. Metóda HPLC v súčasnosti umožňuje izolovať, kvantitatívne a kvalitatívne analyzovať zložité zmesi organických zlúčenín.

Podľa mechanizmu interakcie separovanej látky (eluátu) so stacionárnou fázou sa rozlišuje adsorpčná, distribúcia, iónomeničová, veľkostne vylučovacia, iónovo-párová, ligandová a afinitná chromatografia.

Adsorpčná chromatografia... Separácia adsorpčnou chromatografiou sa uskutočňuje ako výsledok interakcie separovanej látky s adsorbentom, ako je oxid hlinitý alebo silikagél, ktorý má na povrchu aktívne polárne centrá. Rozpúšťadlo (eluent) je nepolárna kvapalina. Sorpčný mechanizmus spočíva v špecifickej interakcii medzi polárnym povrchom sorbentu a polárnymi (resp. schopnými polarizácie) oblasťami molekúl analyzovanej zložky (obr. 1).

Ryža. 1. Adsorpčná kvapalinová chromatografia.

Deliaca chromatografia... V distribučnom variante kvapalinovej chromatografie sa separácia zmesi látok uskutočňuje v dôsledku rozdielu v ich distribučných koeficientoch medzi dvoma nemiešateľnými fázami - eluentom (mobilná fáza) a fázou na sorbente (stacionárna fáza).

o normálna fáza Vo variante distribučnej kvapalinovej chromatografie sa používa nepolárny eluent a polárne skupiny naočkované na povrch sorbentu (najčastejšie silikagél). Ako modifikátory povrchu silikagélu (vrúbľované fázy) sa používajú substituované alkylchlórsilány obsahujúce polárne skupiny, ako je nitril, aminoskupiny atď. (obr. 2). Použitie očkovaných fáz umožňuje jemné riadenie sorpčných vlastností povrchu stacionárnej fázy a dosiahnutie vysokej účinnosti separácie.

Ryža. 2. Deliaca chromatografia s naočkovanou fázou (variant s normálnou fázou).

Obrátená fáza kvapalinová chromatografia je založená na rozdelení zložiek zmesi medzi polárny eluent a nepolárne skupiny (dlhé alkylové reťazce) navrúbľované na povrch sorbentu (obr. 3).

Ryža. 3. Deliaca chromatografia s naočkovanou fázou (verzia s obrátenými fázami).

Menej používaná verzia kvapalinovej chromatografie s nanesenými fázami je, keď sa kvapalná stacionárna fáza nanáša na stacionárny podklad.

Exkluzívne (prenikajúce do gélu) chromatografia je variant kvapalinovej chromatografie, pri ktorej dochádza k separácii látok v dôsledku distribúcie molekúl medzi rozpúšťadlom v póroch sorbentu a rozpúšťadlom prúdiacim medzi jeho časticami.

Afinný chromatografia je založená na špecifických interakciách separovaných proteínov (protilátok) s látkami (antigénmi) navrúbľovanými na povrch sorbentu (syntetickej živice), pričom selektívne tvoria komplexy (konjugáty) s proteínmi.

Iónová výmenná chromatografia, iónovýmenná chromatografia a chromatografia na výmene ligandov sa používajú hlavne v anorganickej analýze.

Základné parametre chromatografickej separácie.

Hlavnými parametrami chromatografickej separácie sú retenčný objem a retenčný čas zložky zmesi (obr. 4).

Retenčný čas tR je čas, ktorý uplynie od momentu vstreknutia vzorky do kolóny, kým sa neobjaví maximum zodpovedajúceho píku. Vynásobením retenčného času objemovou rýchlosťou eluentu F získame retenčný objem VR:

Opravený retenčný čas - čas, ktorý uplynul od okamihu objavenia sa maximálneho píku nesorbovanej zložky po vrchol zodpovedajúcej zlúčeniny:

tR" = tR - t0 ;

Znížený alebo upravený retenčný objem je retenčný objem korigovaný na mŕtvy objem kolóny V0, t. j. retenčný objem nesorbovanej zložky:

VR = VR - V0;

Retenčnou charakteristikou je aj kapacitný koeficient k ", definovaný ako pomer hmotnosti látky v stacionárnej fáze k hmotnosti látky v mobilnej fáze: k" = mn / mp;

Hodnota k sa dá ľahko určiť z chromatogramu:

Najdôležitejšími parametrami chromatografickej separácie sú jej účinnosť a selektivita.

Účinnosť kolóny, meraná výškou teoretických poschodí (HETT) a nepriamo úmerná ich počtu (N), čím vyššia, tým užší je pík látky vystupujúcej v rovnakom retenčnom čase. Hodnotu účinnosti možno vypočítať z chromatogramu pomocou nasledujúceho vzorca:

N = 5,54. (tR / 1/2) 2,

kde tR- retenčný čas,

w 1/2 - šírka píku v polovici výšky

Keď poznáme počet teoretických poschodí na kolónu, dĺžku kolóny L a priemerný priemer zŕn sorbentu dc, je ľahké získať hodnoty výšky ekvivalentnej teoretickej úrovni (HETT) a zníženej výšky (PVETT):

VETT = L / N PVETT = VETT / d c

Tieto charakteristiky umožňujú porovnať účinnosť rôznych typov kolón, posúdiť kvalitu sorbentu a kvalitu plnenia kolón.

Selektivita separácie dvoch látok je určená rovnicou:

Pri uvažovaní o separácii zmesi dvoch zložiek je dôležitým parametrom aj stupeň separácie RS:

;

Píky sa považujú za povolené, ak je hodnota RS väčšia alebo rovná 1,5.

Hlavné chromatografické parametre sú spojené nasledujúcou rovnicou pre rozlíšenie:

;

Faktory určujúce selektivitu separácie sú:

1) chemická povaha sorbentu;

2) zloženie rozpúšťadla a jeho modifikátorov;

3) chemická štruktúra a vlastnosti zložiek zmesi, ktorá sa má oddeliť;

4) teplota kolóny

1.1 Prístroj na kvapalinovú chromatografiu

V modernej kvapalinovej chromatografii sa používajú zariadenia rôzneho stupňa zložitosti - od najjednoduchších systémov až po chromatografy vysokej triedy vybavené rôznymi prídavnými zariadeniami.

Na obr. 4. je uvedená bloková schéma kvapalinového chromatografu, ktorá obsahuje minimálnu požadovanú sadu komponentov, v tej či onej forme, prítomných v akomkoľvek chromatografickom systéme.

Ryža. 4. Bloková schéma kvapalinového chromatografu.

Čerpadlo (2) je navrhnuté tak, aby vytváralo konštantný prietok rozpúšťadla. Jeho dizajn je primárne určený prevádzkovým tlakom v systéme. Na prevádzku v rozsahu 10-500 MPa sa používajú piestové (striekačky) alebo piestové čerpadlá. Nevýhodou prvého je potreba pravidelných prestávok na plnenie eluentom a druhého veľká zložitosť konštrukcie a v dôsledku toho vysoká cena. Pre jednoduché systémy s nízkymi prevádzkovými tlakmi 1-5 MPa sa úspešne používajú lacné peristaltické čerpadlá, ale keďže je ťažké dosiahnuť konštantný tlak a prietok, ich použitie je obmedzené na prípravné úlohy.

Injektor (3) zaisťuje, že vzorka zmesi zložiek, ktoré sa majú separovať, je vstrekovaná do kolóny s dostatočne vysokou reprodukovateľnosťou. Jednoduché systémy odberu vzoriek so zastavením prietoku vyžadujú zastavenie čerpadla, a preto sú menej pohodlné ako dávkovače Reodyne so slučkou.

HPLC kolóny (4) sú hrubostenné rúrky z nehrdzavejúcej ocele, ktoré vydržia vysoký tlak. Dôležitú úlohu zohráva hustota a rovnomernosť náplne kolóny so sorbentom. Pre nízkotlakovú kvapalinovú chromatografiu sa úspešne používajú hrubostenné sklenené kolóny. Teplotnú stálosť zabezpečuje termostat (5).

Detektory (6) pre kvapalinovú chromatografiu majú prietokovú kyvetu, v ktorej sa kontinuálne merajú niektoré vlastnosti prúdiaceho eluentu. Najpopulárnejšími typmi detektorov na všeobecné použitie sú refraktometre, ktoré merajú index lomu, a spektrofotometrické detektory, ktoré merajú absorbanciu rozpúšťadla pri pevnej vlnovej dĺžke (zvyčajne v ultrafialovej oblasti). Medzi výhody refraktometrov (a nevýhody spektrofotometrov) patrí nízka citlivosť na typ stanovovanej zlúčeniny, ktorá nemusí obsahovať chromoforové skupiny. Na druhej strane je použitie refraktometrov obmedzené na izokratické systémy (s konštantným zložením eluentu), takže použitie gradientu rozpúšťadla v tomto prípade nie je možné.

HPLC kolóny, ktoré sa najčastejšie používajú pri analýze látok znečisťujúcich životné prostredie, majú dĺžku 25 cm a vnútorný priemer 4,6 mm, sú naplnené sférickými časticami silikagélu s veľkosťou 5-10 µm s naočkovanými oktadecylovými skupinami. V posledných rokoch sa objavili kolóny s menšími vnútornými priemermi, plnené menšími časticami. Použitie takýchto kolón vedie k zníženiu spotreby rozpúšťadla a času analýzy, zvýšeniu citlivosti a účinnosti separácie a tiež uľahčuje problém pripojenia kolón k spektrálnym detektorom. Kolóny s vnútorným priemerom 3,1 mm sú vybavené bezpečnostnou patrónou (predkolónou) pre zvýšenie životnosti a zlepšenie reprodukovateľnosti analýz.

Ako detektory v moderných HPLC zariadeniach sa zvyčajne používa UV detektor na diódovej matrici, fluorescenčný a elektrochemický.

V praxi je najrozšírenejšia „reverzná fázová“ (distribučná) chromatografia, pri ktorej stacionárna fáza nie je polárna, ale mobilná fáza je polárna (čiže reverzná chromatografia s „priamou fázou“).

Vo väčšine laboratórií na svete sa skupina 16 prioritných PAH analyzuje pomocou HPLC alebo CMS.

KAPITOLA 2. PODSTATA HPLC

Pri vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografii (HPLC) je povaha procesov prebiehajúcich v chromatografickej kolóne vo všeobecnosti identická s procesmi v plynovej chromatografii. Jediným rozdielom je použitie kvapaliny ako stacionárnej fázy. Vzhľadom na vysokú hustotu kvapalných mobilných fáz a vysoký odpor kolóny sa plynová a kvapalinová chromatografia značne líšia svojim hardvérovým dizajnom.

V HPLC sa ako mobilné fázy zvyčajne používajú čisté rozpúšťadlá alebo ich zmesi.

Na vytvorenie prúdu čistého rozpúšťadla (alebo zmesí rozpúšťadiel), ktorý sa v kvapalinovej chromatografii nazýva eluent, sa v hydraulickom systéme chromatografu používajú čerpadlá.

Adsorpčná chromatografia sa uskutočňuje ako výsledok interakcie látky s adsorbentmi, ako je silikagél alebo oxid hlinitý, ktoré majú aktívne centrá na povrchu. Rozdiel v schopnosti interagovať s adsorpčnými centrami rôznych molekúl vzorky vedie k ich rozdeleniu do zón počas pohybu s mobilnou fázou pozdĺž kolóny. Oddelenie zón zložiek dosiahnuté v tomto prípade závisí od interakcie s rozpúšťadlom a adsorbentom.

Silikagélové adsorbenty s rôznymi objemami, povrchmi a priemermi pórov sa najčastejšie používajú v HPLC. Oxid hlinitý a iné adsorbenty sa používajú oveľa menej často. Hlavným dôvodom je:

Nedostatočná mechanická pevnosť, ktorá neumožňuje balenie a použitie pri zvýšených tlakoch typických pre HPLC;

silikagél má v porovnaní s oxidom hlinitým širší rozsah pórovitosti, plochy povrchu a priemeru pórov; výrazne vyššia katalytická aktivita oxidu hlinitého vedie k skresleniu výsledkov analýzy v dôsledku rozkladu zložiek vzorky alebo ich nevratnej chemisorpcie.

HPLC detektory

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) sa používa na detekciu polárnych neprchavých látok, ktoré sa z akéhokoľvek dôvodu nedajú previesť do formy vhodnej pre plynovú chromatografiu, a to ani vo forme derivátov. Medzi tieto látky patria najmä sulfónové kyseliny, vo vode rozpustné farbivá a niektoré pesticídy, ako sú deriváty fenylmočoviny.

Detektory:

UV - diódový detektor poľa. „Matrica“ fotodiód (je ich viac ako dvesto) neustále registruje signály v UV a viditeľnej spektrálnej oblasti, čím zabezpečuje záznam UV-B spektier v režime skenovania. To umožňuje nepretržite zaznamenávať s vysokou citlivosťou neskreslené spektrá komponentov rýchlo prechádzajúcich špeciálnou bunkou.

V porovnaní s detekciou na jednej vlnovej dĺžke, ktorá neposkytuje informáciu o „čistote“ píku, možnosť porovnania celých spektier diódového poľa poskytuje výsledok identifikácie s oveľa vyššou mierou spoľahlivosti.

Fluorescenčný detektor. Veľká obľuba fluorescenčných detektorov je spôsobená veľmi vysokou selektivitou a citlivosťou a tým, že mnohé látky znečisťujúce životné prostredie fluoreskujú (napríklad polyaromatické uhľovodíky).

Elektrochemický detektor sa používa na detekciu látok, ktoré sa ľahko oxidujú alebo redukujú: fenoly, merkaptány, amíny, aromatické nitro a halogénderiváty, ketónaldehydy, benzidíny.

Chromatografická separácia zmesi na kolóne v dôsledku pomalého postupu PP trvá dlho. Na urýchlenie procesu sa chromatografia uskutočňuje pod tlakom. Táto metóda sa nazýva vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC).

Modernizácia zariadenia používaného v klasickej kvapalinovej stĺpcovej chromatografii z nej urobila jednu z najsľubnejších a najmodernejších metód analýzy. Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia je vhodná metóda na separáciu, preparatívnu izoláciu a kvalitatívnu a kvantitatívnu analýzu neprchavých termolabilných zlúčenín s nízkou aj vysokou molekulovou hmotnosťou.

V závislosti od typu sorbentu použitého pri tejto metóde sa používajú 2 možnosti chromatografie: na polárnom sorbente s nepolárnym eluentom (možnosť s priamou fázou) a na nepolárnom sorbente s použitím polárneho eluentu - tzv. fázová vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC).

Keď eluent prechádza do eluentu, rovnováha v podmienkach HPLC sa ustanoví mnohonásobne rýchlejšie ako v podmienkach polárnych sorbentov a nevodných PP. V dôsledku toho, ako aj pohodlnosti práce s vodnými a vodno-alkoholickými eluentmi, si v súčasnosti Off-HPLC získala veľkú popularitu. Väčšina analýz HPLC sa uskutočňuje pomocou tejto metódy.

Detektory. Registrácia výstupu z kolóny samostatného komponentu sa vykonáva pomocou detektora. Na registráciu môžete použiť zmenu akéhokoľvek analytického signálu prichádzajúceho z mobilnej fázy a súvisiaceho s povahou a množstvom zložky zmesi. V kvapalinovej chromatografii sa využívajú analytické signály ako absorpcia svetla alebo emisia svetla výstupného roztoku (fotometrické a fluorometrické detektory), index lomu (refraktometrické detektory), potenciál a elektrická vodivosť (elektrochemické detektory) atď.

Priebežne detekovaný signál je zaznamenávaný záznamníkom. Chromatogram je sekvencia signálov detektora zaznamenaná na záznamovej páske, generovaná, keď jednotlivé zložky zmesi opúšťajú kolónu. V prípade separácie zmesi sú na vonkajšom chromatograme viditeľné jednotlivé píky. Poloha píku na chromatograme sa používa na účely identifikácie, výška alebo plocha píku sa používa na účely kvantifikácie.

2.1 Aplikácia

HPLC sa najčastejšie používa v nasledujúcich oblastiach chemickej analýzy (predmety analýzy sú zvýraznené, kde HPLC prakticky nemá konkurenciu):

· Kontrola kvality potravín - tonizujúce a dochucovacie prísady, aldehydy, ketóny, vitamíny, cukry, farbivá, konzervačné látky, hormóny, antibiotiká, triazín, karbamát a iné pesticídy, mykotoxíny, nitrozamíny, polycyklické aromatické uhľovodíky atď.

· Ochrana životného prostredia - fenoly, organické nitrozlúčeniny, mono- a polycyklické aromatické uhľovodíky, množstvo pesticídov, hlavné anióny a katióny.

· Forenzná veda – drogy, organické výbušniny a farbivá, silné liečivá.

· Farmaceutický priemysel - steroidné hormóny, takmer všetky produkty organickej syntézy, antibiotiká, polymérne prípravky, vitamíny, proteínové prípravky.

· Liečivo - uvedené biochemické a liečivé látky a ich metabolity v biologických tekutinách (aminokyseliny, puríny a pyrimidíny, steroidné hormóny, lipidy) pri diagnostike ochorení, zisťovaní rýchlosti vylučovania liečiv z organizmu za účelom ich individuálneho dávkovania.

· Poľnohospodárstvo - stanovenie dusičnanov a fosforečnanov v pôdach na stanovenie potrebného množstva aplikovaných hnojív, stanovenie nutričnej hodnoty krmív (aminokyseliny a vitamíny), rozbor pesticídov v pôde, vode a poľnohospodárskych produktoch.

Biochémia, bioorganická chémia, genetické inžinierstvo, biotechnológia - cukry, lipidy, steroidy, proteíny, aminokyseliny, nukleozidy a ich deriváty, vitamíny, peptidy, oligonukleotidy, porfyríny atď.

· Organická chémia - všetky stabilné produkty organickej syntézy, farbivá, termolabilné zlúčeniny, neprchavé zlúčeniny; anorganická chémia (takmer všetky rozpustné zlúčeniny vo forme iónov a komplexných zlúčenín).

· Kontrola kvality a bezpečnosti potravinárskych výrobkov, alkoholických a nealkoholických nápojov, pitnej vody, chemikálií pre domácnosť, parfumov vo všetkých fázach ich výroby;

· Určenie povahy znečistenia na mieste katastrofy spôsobenej ľudskou činnosťou alebo mimoriadnej udalosti;

· Detekcia a analýza omamných, silných, jedovatých a výbušných látok;

· Stanovenie prítomnosti škodlivých látok (polycyklické a iné aromatické uhľovodíky, fenoly, pesticídy, organické farbivá, ióny ťažkých, alkalických kovov a kovov alkalických zemín) v kvapalných odpadoch, emisiách do ovzdušia a tuhých odpadoch z podnikov a v živých organizmoch;

· Monitorovanie procesov organickej syntézy, rafinácie ropy a uhlia, biochemického a mikrobiologického priemyslu;

analýza kvality pôdy na hnojenie, prítomnosť pesticídov a herbicídov v pôde, vode a produktoch, ako aj nutričná hodnota krmív; komplexné výskumné analytické úlohy; získanie stopového množstva ultračistej látky.

KAPITOLA 3. PRÍKLADY POUŽITIA HPLC PRI ANALÝZE ENVIRONMENTÁLNYCH OBJEKTOV

HPLC - metóda na monitorovanie PAU v objektoch životného prostredia

Pre polycyklické aromatické uhľovodíky (PAH), ekotoxické látky 1. triedy nebezpečnosti, boli stanovené extrémne nízke hladiny maximálnych povolených koncentrácií (MPC) v prírodných objektoch. Stanovenie PAH na úrovni MPC a nižšej je jednou z veľmi zložitých analytických úloh a na ich riešenie sa využívajú high-tech metódy analýzy (GC-MS, GC, HPLC). Pri výbere metódy monitorovania sa k hlavným uvažovaným charakteristikám - citlivosť a selektivita, rýchlosť a hospodárnosť pridávajú od r monitorovanie zahŕňa sériovú analýzu. Možnosť HPLC na krátkych kolónach s malým priemerom tieto požiadavky do značnej miery spĺňa. Pomocou tejto metódy autori vyvinuli a certifikovali metódy na monitorovanie benzo[a]pyrénu v troch prírodných prostrediach: aerosól, snehová pokrývka a povrchové vody. Techniky sa vyznačujú: jednoduchou unifikovanou prípravou vzorky vrátane extrakcie PAU organickými rozpúšťadlami a zahustením extraktu, priamym zavedením koncentrovaného extraktu do chromatografickej kolóny, využitím viacvlnovej fotometrickej detekcie v UV oblasti spektrum, identifikácia píkov PAH v chromatogramoch pomocou dvoch parametrov, retenčného času a spektrálneho pomeru ... Celková chyba nepresahuje 10 % pri stanovení benzo [a] pyrénu v aerosóle v koncentračnom rozsahu od 0,3 do 450 ng / m 3, v povrchových vodách v koncentračnom rozsahu od 10 do 1 000 ng / l, v snehovej pokrývke v r. rozsah povrchovej hustoty od 0,5 do 50 μg/m2. Pre prípad súčasného stanovenia prioritných PAH (do 12 zlúčenín) a registrácie nehomogénnych píkov analytov sa navrhuje preseparácia extraktu so zmenou selektivity mobilnej fázy, vlnovej dĺžky detekcie a teploty kolóny, s prihliadnutím na jednotlivé vlastnosti stanovených PAU.

1 ... Kvalita okolitého vzduchu. Hmotnostná koncentrácia benzo[a]pyrénu. HPLC meracia technika. Osvedčenie o atestácii MVI č. 01-2000.

2 ... Kvalita povrchových a čistených odpadových vôd. Hmotnostná koncentrácia benzo[a]pyrénu. HPLC meracia technika. Osvedčenie o atestácii MVI č. 01-2001.

3 ... Kvalita snehu. Hmotnostná koncentrácia benzo[a]pyrénu. HPLC meracia technika. Osvedčenie o atestácii MVI č. 02-2001.

Odstránenie anilínu z vodných roztokov pomocou odpadovej alumotermálnej redukcie valcovaného medeného okují

Problém odstraňovania uhľovodíkov z odpadových vôd je naliehavou úlohou. V mnohých chemických, petrochemických a iných priemyselných odvetviach vzniká anilín a jeho deriváty, čo sú toxické látky. Anilín je vysoko toxická látka, maximálna koncentrácia je 0,1 mg/m3. Anilín a jeho deriváty sú rozpustné vo vode, a preto ich nemožno odstrániť gravitačným usadzovaním.

Jednou z najlepších metód na čistenie odpadových vôd od organických polutantov je použitie anorganických a organických adsorbentov schopných regenerácie (hlinitosilikáty, modifikované íly, drevo, vlákna atď.) a neschopných regenerácie (aktívne uhlie, makroporézne polymérne materiály atď.) .).

Regenerované adsorbenty dokážu z vody odstrániť organické látky rôznej polarity. Hľadanie účinných adsorbentov je naliehavou úlohou.

Táto správa prezentuje výsledky štúdie v oblasti aplikácie valcovaných medených okují Jerevanského závodu na výrobu káblov (OPMOERKZ) ako anilínových sorbentov.

Chromatografické štúdie sa uskutočnili na HPLC chromatografe / vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografii / systémoch (Waters 486 - detektor, Waters 600S - kontrolér, Waters 626 - Pump), na kolóne 250 x 4 mm naplnenej skúmanými sorbentmi, mobilnom fázová rýchlosť 1 ml / m / mobilná fáza sú nami skúmané rozpúšťadlá /, detektor je UV-254. UV spektroskopická analýza sa uskutočnila na spektrofotometri Specord-50, spektrá sa získali pomocou počítačového programu ASPECT PLUS.

K určitým objemom anilínu vo vode sa pridávali presne navážené dávky sorbentov, ktorých počiatočné koncentrácie sa menili. Zmes sa dôkladne pretrepáva 6 hodín a potom sa vzorka nechá usadiť. Adsorpcia je ukončená prakticky do 48 hodín Množstvo vyzrážaného anilínu bolo stanovené UV spektrofotometrickou a refraktometrickou analýzou.

Najprv sa skúmali adsorpčné vlastnosti OPMOErKZ, keď sa anilín odstránil z roztoku v tetrachlórmetáne. Ukázalo sa, že anilín najlepšie absorbuje sorbent 3 (tabuľka).

Merania boli vykonané aj pre vodné roztoky anilínu v koncentráciách 0,01-0,0001 mol/l. V tabuľke sú uvedené údaje pre 0,01 M roztok.

Absorpcia anilínu rôznymi sorbentmi z 0,01 M vodného roztoku anilínu pri 20 °C

Predtým sa zistilo, že adsorpcia sa zvyšuje v rámci špecifikovaného koncentračného rozsahu a lineárne závisí od indexu lomu. Množstvo anilínu sa určilo z grafického vzťahu "index lomu - molárna koncentrácia" a korigovalo sa údajmi kvapalinovej chromatografie a UV spektrálnej analýzy.

Pre vodné roztoky je najaktívnejší sorbent 3. Množstvo adsorbovanej škodliviny bolo vypočítané ako rozdiel medzi celkovým množstvom znečisťujúcej látky pridanej do pôvodného roztoku a jej zvyškom v konečnom roztoku.

Metódy stanovenia PAU v objektoch životného prostredia

Na stanovenie PAH sa zvyčajne používajú metódy plynovej chromatografie (GC) a vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC). separácia hlavných 16 PAH, dostatočná na kvantitatívnu analýzu, sa dosiahne použitím buď kapilárnych kolón v plynovej chromatografii, alebo vysokovýkonných kolón používaných v HPLC. Malo by sa pamätať na to, že kolóna, ktorá dobre separuje kalibračné zmesi šestnástich PAH, nezaručuje, že sa budú dobre separovať aj na pozadí sprievodných organických zlúčenín v testovaných vzorkách.

Pre zjednodušenie analýzy, ako aj pre dosiahnutie vysokej kvality získaných výsledkov väčšina analytických postupov obsahuje štádium predbežnej izolácie (separácie) PAU od ostatných skupín príbuzných zlúčenín vo vzorkách. Na tento účel sa najčastejšie používajú techniky nízkotlakovej kvapalinovej-tuhej alebo kvapalina-kvapalinovej chromatografie s použitím adsorpčných mechanizmov, ako je silikagél alebo oxid hlinitý, niekedy sa používajú zmiešané mechanizmy, ako je adsorpcia a eliminácia pomocou Sephadexu.

Použitie predbežného čistenia vzoriek umožňuje vyhnúť sa vplyvu:

Úplne nepolárne zlúčeniny, ako sú alifatické uhľovodíky;

Stredne až vysoko polárne zlúčeniny, ako sú ftalány, fenoly, viacsýtne alkoholy, kyseliny;

Vysokomolekulárne zlúčeniny, ako sú živice.

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) využíva najmä dva typy detektorov: fluorometrický detektor alebo spektrofotometrický detektor s fotodiódovým poľom. Detekčný limit pre PAH pri fluorometrickej detekcii je veľmi nízky, čo robí túto metódu obzvlášť vhodnou na stanovenie stopových množstiev polyaromatických zlúčenín. Klasické fluorometrické detektory však neposkytujú prakticky žiadne informácie o štruktúre skúmanej zlúčeniny. Moderné konštrukcie umožňujú zaznamenať fluorescenčné spektrá, ktoré sú charakteristické pre jednotlivé zlúčeniny, no v praxi rutinných meraní sa zatiaľ nerozšírili. Spektrofotometrický detektor s fotodiódovým pravítkom (PDL) umožňuje registrovať absorpčné spektrá v UV a viditeľnom spektrálnom rozsahu, tieto spektrá možno použiť na identifikáciu. Podobné informácie možno získať pomocou detektorov rýchleho skenovania.

Pri výbere analytickej techniky na separáciu, identifikáciu a kvantitatívnu analýzu uvedených PAH je potrebné vziať do úvahy nasledujúce podmienky:

hladina stanovených obsahov v skúšobných vzorkách;

Počet príbuzných látok;

Použitý analytický postup (technika merania);

Schopnosti sériového zariadenia.

Vývoj metódy na stanovenie prvkov alkalických zemín a horčíka iónovou vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou

Vývoj a zdokonaľovanie metód, ktoré umožňujú riešiť problémy analýzy vody, je dôležitým problémom analytickej chémie. Rozvoj vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie pri vysokom tlaku podnietil vývoj nového smeru v iónovo-výmennej chromatografii, takzvanej iónovej chromatografii. Syntéza sorbentov pre iónovú chromatografiu je náročná, pretože je na ne kladených veľa požiadaviek. Pre nedostatok komerčne dostupných vysoko účinných katexov bola použitá dynamicky modifikovaná reverzná fáza, pre ktorú bol syntetizovaný modifikátor: kyselina N-hexadecyl-N-dekanoyl-paraminobenoylsulfónová etyl-diizopropylamónium (DHDASK), kde hydrofóbny amín obsahujúci SO 3 - skupina, schopná výmeny katiónov. Po prechode roztokom modifikátora dosiahla absorpcia pri l = 260 nm 6,4 jednotiek optickej hustoty (°E) s plató. Vypočítaná kapacita výmeny iónov je 15,65 μmol. Keďže katióny prvkov alkalických zemín a horčíka neabsorbujú v UV oblasti spektra, bola použitá nepriama UV detekcia s použitím syntetizovaného UV absorbujúceho eluentu 1,4-dipyridíniumbutánbromidu (DPB bromid). Pretože halogénové ióny ničia oceľové časti kolóny, bol bromidový ión 1,4-dipyridíniumbutánu nahradený acetátovým iónom. Keď sa kolóna premyje eluentom, protiión modifikátora, etyldiizopropylamónium, sa nahradí UV-absorbujúcim 1,4-dipyridíniumbutánovým iónom. Separácia katiónov bola uskutočnená pri optimálnej vlnovej dĺžke l = 260 nm na stupnici 0,4 A v režime „skladanie mierky“; polarita rekordéra bola obrátená. Separácia všetkých študovaných katiónov bola dosiahnutá zavedením komplexotvornej prísady, kyseliny šťaveľovej. Detekčné limity pre Mg 2+, Ca 2+, Sr 2+, Ba 2+ sú 8 μg / l; 16 ug/l; 34 ug/l; 72 μg/l, resp. Za zvolených podmienok bola analyzovaná voda z vodovodu, v ktorej je obsah Ca 2+ 10,6 + 1,9 mg iónu / l, Mg 2 + -2,5 + mg iónu / l. Chyba reprodukovateľnosti nepresahuje -2,2 % pre Ca2+ a 1,4 % pre Mg2+.

Analýza komplexov kadmia v životnom prostredí

Na štúdium mechanizmov migrácie ťažkých kovov v biosfére sú potrebné údaje o chemických formách existencie kovov v prírode. Ťažkosti pri analýze zlúčenín jedného z najtoxickejších kovov – kadmia – sú spojené s tým, že vytvára krehké komplexy a pri pokuse o ich izoláciu dochádza k narušeniu prirodzenej rovnováhy. V tejto práci boli skúmané zlúčeniny kadmia v pôde a rastlinách pomocou techniky založenej na chromatografickej separácii extraktov s následnou identifikáciou zložiek chemickou analýzou. Tento prístup umožnil nielen identifikovať chemické formy kadmia, ale aj sledovať ich premeny v objektoch životného prostredia.

OH-skupiny sacharidov a polyfenolov (vrátane flavonoidov), C = O, fosfáty, NH 2, NO 2, SH-skupiny sú koordinované s kadmiom v objektoch biosféry. Na účely tejto štúdie bol zostavený súbor modelových ligandov reprezentujúcich tieto triedy zlúčenín. Interakcia modelových ligandov s vo vode rozpustnými soľami kadmia bola skúmaná UV spektroskopiou a HPLC.

Na izoláciu zlúčenín kadmia sme použili extrakciu špeciálne vybranými (netvoriacimi komplexy s Cd) rozpúšťadlami. Kadmium je teda možné oddeliť od všetkých ťažkých kovov, okrem jeho blízkeho chemického analógu – zinku. Píky obsahujúce kadmium a zinok v chromatogramoch získaných extraktov boli detekované väzbou kovov vo forme ich ditizonátov. Na separáciu od zinku bol použitý rozdiel v stabilite komplexov Cd a Zn pri pH 6-8. Izolované Cd zlúčeniny boli identifikované pomocou HPLC so zmenou pH počas elúcie. Uskutočnila sa analýza zlúčenín kadmia so zložkami pôd a rastlinných tkanív a identifikovali sa látky produkované rastlinami v reakcii na zvýšený príjem kadmia z pôdy. Ukázalo sa, že flavonoidy, najmä tricín, sú ochrannými činidlami v obilninách, alkoxyderiváty cysteínu v strukovinách a polyfenoly aj tioly v krížoch.

KAPITOLA 4. VYBAVENIE HPLC

SÉRIA ACCELA

Nový ultra-výkonný kvapalinový chromatograf ACCELA je schopný pracovať v najširšom rozsahu prietokov a tlakov, pričom poskytuje ako typickú HPLC separáciu na konvenčných kolónach, tak ultra rýchlu a efektívnu separáciu na kolónach s veľkosťou častíc sorbentu menšou ako 2 μm pri ultravysokých tlakoch (nad 1000 atm.).

Systém obsahuje vstupné čerpadlo so štvrťročným gradientom schopné dosahovať tlaky presahujúce 1000 barov a so zásobným objemom iba 65 µl na vysokorýchlostnú chromatografickú separáciu. Autosampler ACCELA je schopný pracovať v 30 sekundovom cykle vstrekovania vzorky a poskytuje najvyššiu reprodukovateľnosť vstrekovania. Detektor diódového poľa Accela PDA s minimalizovaným objemom prietokovej kyvety (2 μL) je optimalizovaný pre režim vysokorýchlostnej chromatografie, využíva patentovanú technológiu LightPipe a zachováva si symetrický tvar piku, ktorý je výsledkom použitia bezchybného chromatografického systému a kolón.

Systém sa dokonale integruje s hmotnostnými spektrometrami a vytvára najvýkonnejšie a najlepšie systémy HPLC / MS dostupné na svete.

UHP kolóny s veľkosťou zrna 1,9 μm dostupné od Thermo Electron pre akúkoľvek aplikáciu

SÉRIA TSP

Modulárny princíp konštrukcie HPLC prístrojov umožňuje zákazníkovi flexibilne dopĺňať vybavenie pre riešenie akýchkoľvek analytických úloh a v prípade ich zmeny je možné ho rýchlo a ekonomicky upraviť. Široká škála modulov zahŕňa čerpadlá od izokratických až po štvorzložkové gradienty, od mikrokolón až po semipreparatívne, všetky dostupné detektory, systémy vstrekovania vzoriek od ručných injektorov po autosamplery s akoukoľvek možnosťou manipulácie so vzorkami, výkonný softvér na spracovanie výsledkov meraní a riadenie všetkých systémové moduly. Všetky moduly sú certifikované podľa CSA, TUF/GS, FCC (EMI), VDE (EMI), ISO-9000, sú kompaktné, majú moderný dizajn, ľahko sa ovládajú, sú vybavené vstavaným displejom a samost. -diagnostický systém, umožňuje vytvárať a ukladať parametre metód úloh. Spĺňajú kritériá „Správnej laboratórnej praxe“ (SLP) a sú uvedené v Registri meracích prístrojov Ruskej federácie. Správy o meraní sa vydávajú v súlade s liekopismi Anglicka, USA, Nemecka a Francúzska.

Modulárne systémy TSP sa vyznačujú najvyššou spoľahlivosťou a prevádzkovou stabilitou.

Kombinácia modulov poskytuje analytikovi všetky výhody integrovaného systému na jednej strane a flexibilitu modulárneho systému na strane druhej. V akejkoľvek oblasti použitia HPLC - farmakológia, biotechnológia, environmentálna analýza, klinická analýza, analýza potravín a nápojov, petrochemická a chemická analýza - toto zariadenie sa nepoužíva, vždy je optimálne nakonfigurované tak, aby vyhovovalo najvyšším požiadavkám.

Výskumné aj vysokovýkonné rutinné systémy poskytujú:

Vysoko účinné odplynenie rozpúšťadla

Schopnosť manipulovať s malými a veľmi malými množstvami vzoriek

Najvyššia citlivosť, s UV/VIS detektorom aj diódovým poľom (so známou technológiou LightPipe s dĺžkou optickej dráhy 1 alebo 5 cm voliteľne)

Práca s rôznymi stĺpcami

Najvyššia presnosť kvantifikácie

Možnosť automatickej práce s rôznymi objemami vzoriek

Retenčné časy rms chyba menej ako 0,3 %

Minimálna stopa systému

Najvyššia spoľahlivosť a stabilita parametrov.

Surveyor LC Pump- HPLC pumpa s najlepšou reprodukovateľnosťou retenčného času zo všetkých štvorcestných gradientových púmp dostupných na svete. Integrovaný štvorkanálový vákuový odplyňovač a tlmič pulzácií poskytuje vynikajúcu základnú stabilitu pre maximálnu citlivosť a presnosť kvantifikácie.

Autosampler poskytuje najvyšší analytický výkon a flexibilitu. Široká škála podnosov na vzorky – od štandardných liekoviek až po 96 – a 384-jamkové mikrodoštičky – pokryje potreby prakticky všetkých aplikácií. Nová technológia poskytuje prakticky bezstratové vstrekovanie vzorky, takmer 5 μl vzorky sa vstrekne pomocou autosamplera z celkového objemu vzorky 5 μL.

SURVEYOR

UV/Vis detektor a PDA (Diode Array Detector)

Surveyor UV / Vis- detektor UV / viditeľného svetla s premenlivou vlnovou dĺžkou je kombináciou hospodárnosti a spoľahlivosti s najvyššou citlivosťou technológie LightPipe. Široký výber prietokových komôr robí tento detektor všestranným pre všetky aplikácie od kapilárnej alebo mikrokolónovej chromatografie až po semipreparatívnu a preparatívnu.

Surveyor PDA detektor je najcitlivejší zo všetkých HPLC detektorov s diódovým poľom. Optika s dvojlampovým zdrojom bezproblémovo pokrýva celý rozsah vlnových dĺžok od 190 do 800 nm. Tvarovač svetelného lúča z optických vlákien poskytuje vynikajúce optické rozlíšenie bez obetovania citlivosti.

Geodet RI refraktometrický detektor s termostatovanou kyvetou minimálneho objemu s plne elektronickým ovládaním z počítača.

Geodet FL fluorometrický skenovací detektor s najvyššou citlivosťou a schopnosťou detekovať fluorescenciu, chemiluminiscenciu a fosforescenciu.

Široká škála autosamplerov vám umožňuje pracovať s konvenčnými liekovkami a 96-polohovými doštičkami, ktoré sa široko používajú v biochémii a klinickej praxi. Práca s nimi je uľahčená použitím podobných platní na prípravu vzoriek metódou extrakcie tuhou fázou.

Elektrický pohon 400, slučka Valco (20 µl - štandard) s možnosťou čiastočného doplnenia.

Kolotoč 96 vzoriek.

Elektrický pohon, kolónová pec, slučka Valco (100 μL - štandard) s možnosťou čiastočného naplnenia Režim AutoMix na prípravu vzorky. Kolotoč na vzorky: 84 x 2 ml (vzorky) + 3x 10 ml (reagencie). Vstavaný stĺpový termostat. 420

Slučkový autosampler pre výskumnú prácu so schopnosťou pracovať v režime plného, čiastočného naplnenia a mikrolitrového vstrekovania vzorky. Široká ponuka karuselov (štandard - 96 vzoriek).

Tabletový autosampler pre prácu s 96- a 384-polohovými tabletmi. Vstrekovanie vzorky do slučky pod tlakom, možnosť vstreknutia vzoriek menších ako 1 μL. Možnosť inštalácie valníkového podávača. HPLC

Významní výrobcovia zariadení HPLC

· Waters - supervýkonná chromatografia, hmotnostná spektrometria, kolóny, extrakcia na pevnej fáze;

Varian, Inc. - chromatografy a kolóny, príslušenstvo na extrakciu tuhou fázou;

Agilent Technologies - chromatografy a kolóny;

· Hypersil - kolóny a sorbenty.

Merck KGaA - TLC platne a príslušenstvo pre TLC, kolóny, sorbenty, mobilné fázy pre HPLC, príslušenstvo pre extrakciu tuhou fázou

· Dionex - zariadenia a kolóny pre HPLC, najmä pre iónovú chromatografiu.

Literatúra

1.Pilipenko A.T., Pjatnický I.V. Analytická chémia. V dvoch knihách: kniha 1 - M .: Chemistry, 1990, -480s.

1. Pilipenko A.T., Pjatnický I.V. Analytická chémia. V dvoch knihách: kniha 2 - M .: Chemistry, 1990, -480s.

2. Vasiľjev V.P. Analytická chémia. Za 2 hodiny, 2. časť. Fyzikálno-chemické metódy analýzy: Učebnica. pre Khimko - technol. špecialista. univerzity. - M .: Vyššie. shk., 1989. - 384 s.

3. Hydrochemické materiály. Ročník 100. Metódy a technické prostriedky prevádzkového monitorovania kvality povrchových vôd. L .: Gidrometeo-Izdat, 1991 .-- 200. roky.

4. Lurie Yu.Yu. Analytická chémia priemyselných odpadových vôd / Yu.Yu. Lurie; M.: Khimiya, 1984.-- 448s.

5. Ewing G. Inštrumentálne metódy chemickej analýzy / Per. z angličtiny M .: Mir, 1989 .-- 348 s.

6. Gorelik D.O., Konopelko L.A., Pankov E.D. Monitorovanie životného prostredia. V 2 zväzkoch SPb .: Vianoce. 2000 .-- 260 str.

7. Aivazov B.V. Úvod do chromatografie. M.: Vyššie. shk., 1983 .-- 450 s.

8. Goldberg K.A., Vigdergauz M.S. Úvod do plynovej chromatografie. M.: Chémia, 1990.-- 329 s.

9. Stolyarov B.V. et al. // Praktická plynová a kvapalinová chromatografia. SPb.: SPbGU, 1998. - S. 81.

11. Gorshkov A.G., Marinait I.I. HPLC - metóda na monitorovanie PAU v objektoch životného prostredia

12. Torosyan G.O., Martirosyan V.A., Aleksanyan A.R., Zakaryan M.O. Odstránenie anilínu z vodných roztokov pomocou odpadovej aluminotermickej redukcie valcovaných medených okují

13. L.A. Turkina, G.N. Koroleva Vývoj metódy na stanovenie prvkov alkalických zemín a horčíka iónovou vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou

14. Dultseva G.G., Dubtsova Yu.Yu., Skubnevskaya G.I. Analýza komplexov kadmia v životnom prostredí

Aplikácia

STANOVENIE KLOMAZÓNU VO VODE CHROMATOGRAFICKÝMI METÓDAMI

METODICKÉ POKYNY MUK 4.1.1415-03

1. Vypracovalo: Federálne vedecké centrum pre hygienu pomenované po F.F.

Erisman; Moskovská poľnohospodárska akadémia. K.A.

Timiryazev; za účasti Oddelenia štátneho sanitárneho a epidemiologického dohľadu Ministerstva zdravotníctva Ruska. Vývojári metódy sú uvedení na konci.

3. Schvaľuje hlavný štátny sanitár

Za Ruskú federáciu prvý námestník ministra zdravotníctva Ruskej federácie akad. RAMS G.G. Oniščenko 24. júna 2003

5. Prvýkrát predstavený.

1. Úvodná časť

Výrobca: FMS (USA).

Obchodné meno: COMMAND.

Účinná látka: klomazon.

2-(2-chlórbenzyl)-4,4-dimetyl-3-izoxalidín-3-ón (IUPAC)

Svetlohnedá viskózna kvapalina.

Teplota topenia: 25 °C.

Teplota varu: 275 °C.

Tlak pár pri 25 °C: 19,2 MPa.

Rozdeľovací koeficient n-oktanol/voda: K logP = 2,5.

Necháme dobre rozpustiť v acetóne, hexáne, etanole, metanole,

chloroform, dichlórmetán a acetonitril; rozpustnosť vo vode -

1,10 g / cm3 dm. Stabilný pri izbovej teplote najmenej 2 roky, pri 50 -C - najmenej 3 mesiace.

Stručná toxikologická charakteristika: Akútne orálne

toxicita (LD) pre potkany - 1369 - 2077 mg / kg; akútna dermálna

toxicita (LD) pre potkany - viac ako 2000 mg / kg; ostrý

inhalačná toxicita (LC) pre potkany - 4,8 mg / cu. dm (4 h).

Hygienické normy. MPC vo vode - 0,02 mg / cu. dm.

Rozsah lieku. Clomazone je selektívny herbicíd používaný na boj proti obilným a dvojklíčnolistovým burinám v sóji a ryži s aplikáciou pred vzídením alebo pred sejbou.

2. Metóda stanovenia klomazónu vo vode

chromatografické metódy

2.1. Základné ustanovenia

2.1.1. Princíp metódy

Technika je založená na extrakcii clomazonu z analyzovanej vzorky hexánom, zahustení extraktu a následnom kvantitatívnom stanovení alternatívnymi metódami:

vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) s

UV detektor, plynová kvapalinová chromatografia (GLC) s detektorom konštantnej rýchlosti rekombinácie alebo chromatografia na tenkej vrstve (TLC). Kvantifikácia sa vykonáva metódou absolútnej kalibrácie.

2.1.2. Selektivita metódy

Metóda je v navrhnutých podmienkach špecifická v prítomnosti globálnych environmentálnych polutantov: chlórových derivátov cykloparafínov (HCH izoméry), difenylových zlúčenín (DDT a jeho deriváty), ich metabolitov - polychlórovaných benzénov a fenolov, ako aj v prítomnosti trichlóracetát sodný, ktorý možno použiť na plodiny ako herbicíd.

2.1.3. Metrologické charakteristiky metódy (P = 0,95)

Činidlá, roztoky a materiály

Clomazone s obsahom d.v. 99,8 %

(FMS, USA)

Dusík, alebo GOST 9293-79

Amoniakálna voda, 25%, h GOST 1277-81

Acetón, h GOST 2603-79

n-Hexán, h GOST 2603-79

Peroxid vodíka, 30% vodný roztok GOST 10929-77

Izopropylalkohol, reagenčná trieda TU 6-09-402-75

Kyselina sírová, chemicky čistá GOST 4203-77

Kyselina chlorovodíková (kyselina chlorovodíková), stupeň činidla GOST 3118-77

Metylalkohol, reagenčná trieda GOST

Hydroxid sodný, reagenčná čistota, 25% vodný roztok GOST 4323-77

Bezvodý síran sodný, akosť činidla GOST 1277-81

Dusičnan strieborný, reagenčná trieda GOST 1277-81

2-Fenoxymetanol, h TU 6-09-3688-76

Chromaton N-AW-DMCS (0,16 – 0,20 mm)

s 5 % SE-30, Hemapol, Česká republika

Chromaton N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 mm) s 1,5

ОV-17 + 1,95 % QF-1, Hemapol, Česká republika

Doštičky pre HPTLC (ZSSR)

Dosky "Kieselgel 60 F-254" (Nemecko)

Rekordy "Silufol" Česká republika

Biele páskové papierové filtre, bez popola a predprané hexánom TU 6-09-2678-77

2.3. Prístroje, prístroje, riad

Kvapalinový chromatograf Milichrom

s ultrafialovým detektorom

Oceľová chromatografická kolóna,

dĺžka 64 mm, vnútorný priemer 2 mm,

plnené Silasorbom 600, zrnitosť 5 mikrónov

Plynový chromatograf radu "Farebný" príp

podobné, vybavené konštantným detektorom

rýchlosť rekombinácie (RPR) s limitom

detekcia lindanu 4 x 10 g / cm3. cm

Sklenená chromatografická kolóna, dĺžka

1 alebo 2 m, vnútorný priemer 2 - 3 mm

Mikrostriekačka, typ MSh-10, s objemom 10 μl TU 5E2-833-024

Trepačka, typ AVU-6s TU 64-1-2851-78

Voda do kúpeľa TU 64-1-2850-76

Analytické váhy, typ VLA-200 GOST 34104-80E

Chromatografická komora GOST 10565-74

Vodné prúdové čerpadlo GOST 10696-75

Ortuťovo-kremenný žiarič OKN-11 TU 64-1-1618-77

Rozprašovače skla GOST 10391-74

Rotačná vákuová odparka IR-1M

alebo podobný TU 25-11-917-76

Inštalácia kompresora TU 64-1-2985-78

Sušiaca skriňa TU 64-1-1411-76E

Oddeľovacie lieviky GOST 3613-75

Odmerné banky s objemom 100 ml GOST 1770-74

Odmerné valce s objemom 10, 50 ml GOST 1770-74E

Banky hruškovitého tvaru s tenkou časťou,

s kapacitou 100 ml GOST 10394-72

Kužeľové banky s objemom 100 ml GOST 22524-77

Odstredivé skúmavky, objemové GOST 25336-82E

Pipety s kapacitou 0,1, 1, 2, 5 a 10 ml GOST 20292-74

Lieviky, chemické, kužeľové, priem

34 - 40 mm GOST 25336-82E

2.4. Výber vzorky

Odber vzoriek, skladovanie a príprava vzoriek sa vykonáva v súlade s

"Jednotné pravidlá pre odber vzoriek poľnohospodárskych produktov, potravín a environmentálnych objektov na určovanie stopových množstiev pesticídov", schválené pod N 2051-79 z 21.8.

Odobraté vzorky je možné uchovávať v chladničke až 5 dní. Pred analýzou sa voda (ak je suspendovaná) prefiltruje cez voľný papierový filter.

2.5. Príprava na určenie

2.5.1. HPLC metóda

2.5.1.1. Príprava mobilnej fázy pre HPLC

Do odmernej banky s objemom 100 ml sa pipetou vloží 5 ml izopopanolu a 5 ml metanolu, pridá sa po značku hexánom, premieša sa, prefiltruje.

2.5.1.2. Kondicionovanie stĺpcov

Premývajte HPLC kolónu zmesou hexán-metanol-izopropanol (90:5:5 obj./obj.) počas 30 minút. pri rýchlosti dávkovania rozpúšťadla 100 μl / min.

2.5.2. GLC metóda. Príprava a kondicionovanie kolóny

Hotová náplň (5% SE-30 na Chromaton N-AW-DMCS) sa naleje do sklenenej kolóny, utesní sa vo vákuu, kolóna sa nainštaluje do termostatu chromatografu bez pripojenia k detektoru a stabilizuje sa v prúde dusíka pri pri teplote 250 °C počas 10 - 12 h.

2.5.3. TLC metóda

2.5.3.1. Príprava vyvíjacích činidiel

2.5.3.1.1. Vyvolávacie činidlo N 1

1 g dusičnanu strieborného sa rozpustí v 1 ml destilovanej vody, pridá sa 10 ml 2-fenoxymetanolu, 190 ml acetónu, 1 - 2 kvapky peroxidu vodíka, roztok sa premieša a prenesie do fľaše z tmavého skla.

2.5.3.2.2. Vyvolávacie činidlo N2

V 100 ml odmernej banke sa rozpustí 0,5 g dusičnanu strieborného v 5 ml destilovanej vody, pridá sa 10 ml 25 % vodného amoniaku, roztok sa doplní acetónom na 100 ml, premieša sa a prenesie do fľaše z tmavého skla.

2.5.3.2. Príprava mobilnej fázy pre TLC

Do odmernej banky s objemom 100 ml pridajte 20 ml acetónu a pridajte hexán po značku, premiešajte. Zmes sa naleje do chromatografickej komory s vrstvou nie väčšou ako 6 - 8 mm za 30 minút. Pred chromatografiou.

2.5.4. Príprava štandardných roztokov

Základný štandardný roztok klomazonu s obsahom 100 μg/ml sa pripraví rozpustením 0,010 g prípravku s obsahom 99,8 % ai v hexáne v 100 ml odmernej banke. Roztok sa uchováva v chladničke mesiac.

Pracovné štandardné roztoky s koncentráciou 0,4; 1,0; 2,0; 4,0; 10,0; 20 a 40,0 ug/ml sa pripraví zo zásobného štandardného roztoku klomazónu vhodným sériovým riedením hexánom.

Pracovné roztoky sa uchovávajú v chladničke nie dlhšie ako mesiac.

2.5.5. Zostavenie kalibračného grafu

2.5.5.1. Kalibračná tabuľka A (meranie podľa článku 2.7.1, HPLC)

Na zostavenie kalibračného grafu sa do injektora chromatografu vstrekne 5 μl pracovného štandardného roztoku klomazónu s koncentráciou 4,0; 10,0; 20,0 a 40 μg/ml.

2.5.5.2. Kalibračný graf B (meranie podľa článku 2.7.2, GLC)

Na zostavenie kalibračného grafu sa do odparky chromatografu vstrekne 5 μl pracovného štandardného roztoku klomazónu s koncentráciou 0,4; 1,0; 2,0; 4.0 a 10.0.

Vykoná sa najmenej 5 paralelných meraní. Nájdite priemernú hodnotu výšky chromatografického píku pre každú koncentráciu. Vykreslí sa kalibračný graf (A alebo B) pre závislosť výšky chromatografického píku v mm od koncentrácie klomazónu v roztoku v μg/ml.

2.6. Popis definície

100 ml analyzovanej vzorky vody sa umiestni do oddeľovacieho lievika s objemom 250 ml, prileje sa 10 ml 25% vodného roztoku hydroxidu sodného, zamieša sa a pridá sa 20 ml n-hexánu. Lievik sa pretrepáva 3 minúty, po oddelení fáz sa hexánová vrstva naleje do hruškovitej banky s objemom 100 ml a prechádza cez vrstvu bezvodého síranu sodného umiestnenú v kónickom lieviku na preloženom papieri. filter. Extrakcia liečiva z vodnej vzorky sa opakuje ešte dvakrát, vždy s použitím 20 ml n-hexánu. Spojené hexánové extrakty sa odparia na rotačnej vákuovej odparke pri teplote 40 °C takmer do sucha, zvyšok sa odfúkne prúdom vzduchu alebo dusíka vysokej čistoty. Suchý zvyšok sa rozpustí v 0,1 ml (HPLC, TLC) alebo 0,25 ml (GLC) n-hexánu a analyzuje sa jednou z chromatografických metód.

2.7. Chromatografické podmienky

Kvapalinový chromatograf Milichrom s ultrafialovým detektorom (Rusko).

Oceľový stĺp dlhý 64 mm, vnútorný priemer 2 mm,

plnené Silasorbom 600, zrnitosť 5 mikrónov.

Teplota kolóny: izbová teplota.

Mobilná fáza: hexán-izopropanol-metanol (90:5:5, objemovo).

Prietok eluentu: 100 μl / min.

Pracovná vlnová dĺžka: 240 nm.

Citlivosť: 0,4 jednotky absorpcia na stupnici.

Objem vstreknutej vzorky: 5 μl.

Čas uvoľnenia Clomazone: približne 6 minút.

Lineárny rozsah detekcie: 20 - 200 ng.

Vzorky s píkmi väčšími ako 40 μg/ml štandardného roztoku sa zriedia mobilnou fázou HPLC.

Plynový chromatograf "Tsvet-570" s detektorom konštantnej rýchlosti rekombinácie iónov.

Sklenená kolóna s dĺžkou 1 m, vnútorným priemerom 3 mm, naplnená Chromatonom N-AW-DMCS s 5 % SE-30 (0,16 - 0,20 mm).

Pracovná stupnica elektromera je 64 x 10 10 Ohm.

Rýchlosť magnetofónu je 200 mm/h.

Teplota kolónovej pece - 190 -C

detektor - 300 -C

výparník - 220 -C

Prietok nosného plynu (dusíka) - 60 ml / min.

Objem vstreknutej vzorky je 5 μl.

Čas uvoľňovania klomazonu je 2,5 minúty.

Lineárny rozsah detekcie: 2 - 50 ng.

Vzorky s píkmi väčšími ako 10 μg/ml štandardného roztoku sa zriedia hexánom.

Na zlepšenie presnosti identifikácie klomazónu v prítomnosti gama-HCH, ktorý má blízky retenčný čas vo vzorke, sa klomazón zo vzorky odstráni pôsobením koncentrovanej kyseliny sírovej. Opätovná analýza vzorky umožňuje stanoviť príspevok klomazónu k primárnemu chromatografickému signálu.

Roztok hexánu v banke získaný kvantitatívne podľa bodu 2.6

(alebo jeho alikvot) sa nanesie na chromatografické platne „Silufol“, „Kieselgel 60F-254“ alebo „Plates for HPTLC“. Štandardné roztoky sa aplikujú vedľa seba v objeme zodpovedajúcom obsahu klomazónu 1, 2, 5 a 10 μg. Platňa sa umiestni do chromatografickej komory obsahujúcej zmes n-hexán-acetón (4:1 objemovo). Po vyvolaní chromatogramu sa platňa vyberie z komory, umiestni sa pod prievan, kým sa rozpúšťadlá neodparia, potom sa spracuje s jedným z vyvolávacích činidiel a umiestni sa pod ultrafialovú lampu na 5 minút. Zóna lokalizácie liečiva na platniach Silufol, HPTLC a Kizelgel 60F-254 sa javí ako šedo-hnedé škvrny s hodnotami Rf 0,35, 0,85 a 0,43. Na stanovenie clomazonu pomocou TLC môžete použiť platne "Alugram" a "Polygram" (vyrobené v Nemecku). Hodnoty Rf klomazónu na týchto platniach sú 0,37 a 0,38.

3. Bezpečnostné požiadavky

Pri práci s organickými rozpúšťadlami, toxickými látkami, elektrickými vykurovacími zariadeniami je potrebné dodržiavať všeobecne uznávané bezpečnostné pravidlá.

4. Kontrola chyby merania

Prevádzková kontrola chyby merania a reprodukovateľnosti sa vykonáva v súlade s odporúčaniami MI 2335-95. GSI "Interná kontrola kvality výsledkov kvantitatívnej chemickej analýzy".

5. Vývojári

Yudina T.V., Fedorová N.E. (FNTSG pomenovaná po F.F. Erismanovi).

E. I. Davidyuk (UkrNIIGINTOKS, Kyjev); Kisenko M.A., Demčenko V.F. (Ústav pracovného lekárstva Akadémie vied a Akadémie lekárskych vied Ukrajiny, Kyjev).

Podľa mechanizmu separácie analyzovaných alebo separovaných látok sa HPLC delí na adsorpčnú, distribučnú, iónomeničovú, veľkostne vylučovaciu, ligandovú a iné.

Normálna fáza HPLC

Stacionárna fáza je polárnejšia ako mobilná, preto v zložení eluentu prevláda nepolárne rozpúšťadlo:

Hexán:izopropanol = 95:5 (pre látky s nízkou polaritou)
Chloroform:metanol = 95:5 (pre stredne polárne látky)
Chloroform: metanol = 80:20 (pre vysoko polárne látky)

HPLC na reverznej fáze

Typické eluenty pre HPLC s reverznou fázou sú:

Acetonitril: voda
Metanol: voda
Izopropanol: voda

HPLC matrice

Hlavné charakteristiky matice:

Veľkosť častíc (μm);
Vnútorná veľkosť pórov (Å, nm).

Príprava silikagélu pre HPLC:

Vytváranie mikrosfér kyseliny polykremičitej;
Sušenie častíc silikagélu;
Oddelenie vzduchu.

Sorpčné častice:

Pravidelné (sférické): vyššia odolnosť voči tlaku, vyššia cena;
Nesférický: nižšia odolnosť voči tlaku.

Štepy v stacionárnej fáze

Normálna fáza HPLC:

Stacionárna fáza s vrúbľovaním propylnitrilu (nitril);
Stacionárna fáza s propylamínovým štepením (amín).

HPLC s reverznou fázou:

Stacionárna fáza s alkylovým očkovaním;
Stacionárna fáza s alkylsilylovým očkovaním.

HPLC detektory

UV
Diódová matica
Fluorescenčné
Elektrochemické
Refraktometrické
Hromadne selektívne

Odkazy

Nadácia Wikimedia. 2010.

Pozrite si, čo je „Vysokovýkonná kvapalinová chromatografia“ v iných slovníkoch:

Pojem vysokoúčinná kvapalinová chromatografia Anglický výraz vysokoúčinná kvapalinová chromatografia Synonymá Skratky HPLC, HPLC Súvisiace pojmy adsorpcia, oligopeptid, proteomika, sorbent, fullerén, endohedrická, chromatografia ... ...

Kvapalinová chromatografia, aby sa zvýšila účinnosť separácie, rozpúšťadlo (eluent) pod tlakom (viac ako 3x107 Pa) sa čerpá cez kolóny naplnené sorbentom s časticami malého priemeru (do 1 μm) a perfúzna ...

Typ chromatografie, pri ktorej je mobilnou fázou kvapalina (eluent), a to stacionárna. sorbent, tv. nosič s kvapalinou alebo gélom aplikovaným na jeho povrch. Uskutočňuje sa v kolóne naplnenej sorbentom (stĺpcová chromatografia), na plochom ... ... Prírodná veda. encyklopedický slovník

- [κρώμα (υroma) color] proces založený na nerovnakej schopnosti jednotlivých zložiek zmesi (kvapalnej alebo plynnej) zadržiavať sa na povrchu adsorbenta tak pri ich pohlcovaní z nosného prúdu, ako aj pri ... . .. Geologická encyklopédia

- (z inej gréčtiny ... Wikipedia

Pojem chromatografia Anglický pojem chromatografia Synonymá Skratky Súvisiace pojmy vysokoúčinná kvapalinová chromatografia, klatrát, laboratórium na čipe, porozimetria, proteóm, proteomika, sorbent, enzým, fullerén, endohedrálny ... ... Encyklopedický slovník nanotechnológie

Kvapalinová chromatografia založená na rozklade. schopnosť separovaných iónov iónovej výmeny s fixirom. sorbentové ióny vznikajúce v dôsledku disociácie ionogénnych skupín posledne menovaných. Na separáciu katiónov sa používajú katexy, pre ... ... Chemická encyklopédia

HPLC- vysokoúčinná kvapalinová chromatografia ... Slovník skratiek ruského jazyka

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je jednou z najefektívnejších metód na separáciu zložitých zmesí látok, ktorá je široko používaná ako v analytickej chémii, tak aj v chemickej technológii. Základom chromatografickej separácie je participácia ... Wikipedia

knihy

Praktická vysokoúčinná kvapalinová chromatografia, Veronica R. Mayer. Čitateľovi predstavujeme 5. vydanie knihy, ktorá je rozšírená o moderné metódy a zariadenia. V knihe sa veľa zlepšilo a pribudlo veľké množstvo odkazov. Tie miesta v texte, kde...

(OFS 42-0096-09)

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je technika stĺpcovej chromatografie, v ktorej je mobilná fáza (PF) kvapalina

kosť sa pohybuje cez chromatografickú kolónu naplnenú

mobilná fáza (sorbent). HPLC kolóny majú vysoké hydraulické tlaky na vstupe do kolóny, preto sa HPLC niekedy označuje ako

vyvayut "vysokotlaková kvapalinová chromatografia".

V závislosti od mechanizmu separácie látok sa rozlišujú:

Možnosti HPLC: adsorpcia, distribúcia, iónová výmena,

exkluzívne, chirálne a pod.

Pri adsorpčnej chromatografii dochádza k separácii látok v dôsledku ich rozdielnej schopnosti adsorbovať a desorbovať s

povrch adsorbenta s rozvinutým povrchom, napríklad silikagél.

Pri distribučnej HPLC dochádza k separácii v dôsledku rozdielu v distribučných koeficientoch látok, ktoré sa majú separovať, medzi stacionárnymi

(zvyčajne chemicky vrúbľované na povrch imobilného nosiča) a

mobilné fázy.

Podľa polarity PP a NF sa HPLC delí na normálnu fázu a obj.

rozšírená fáza.

Chromatografia na normálnej fáze sa nazýva variant, v ktorom

použite polárny sorbent (napríklad silikagél alebo silikagél s

skrútené NH2 - alebo CN-skupiny) a nepolárne PF (napríklad hexán s vyvinutým

osobné doplnky). Pri chromatografii na reverznej fáze sa

používať nepolárne chemicky modifikované sorbenty (napr.

nepolárny alkylový radikál C18) a polárne mobilné fázy (napr.

metanol, acetonitril).

Pri iónovo-výmennej chromatografii molekuly látok v zmesi, disociácia

tvorené v roztoku na katióny a anióny, sa pri prechode oddeľujú

sorbentu (katión alebo anión) v dôsledku ich rôznych výmenných kurzov s iónovými

mi skupiny sorbentov.

Pri vylúčení (sito, gélová penetrácia, gélová filtrácia)

chromatografiou sa molekuly látok oddeľujú podľa veľkosti v dôsledku ich rozdielnej schopnosti prenikať do pórov stacionárnej fázy. V tomto prípade prvý zo spolu-

vznikajú najväčšie molekuly (s najvyššou molekulovou hmotnosťou), schopné preniknúť do minimálneho počtu pórov stacionárnej fázy,

a posledné sú látky s malými veľkosťami molekúl.

Separácia často prebieha nie jeden po druhom, ale niekoľkými mechanizmami súčasne.

Metódu HPLC možno použiť na kontrolu kvality akéhokoľvek negatívu

zygomatických analytov. Na analýzu použite vhodné prístroje - kvapalinové chromatografy.

Zloženie kvapalinového chromatografu zvyčajne zahŕňa nasledujúce základy -

ny uzly:

– Jednotka na prípravu PF vrátane nádoby s mobilnou fázou (alebo kapacitným

s jednotlivými rozpúšťadlami, ktoré sú súčasťou mobilnej fázy

zy) a odplyňovací systém PF;

– čerpací systém;

– mixér mobilnej fázy (ak je to potrebné);

– systém vstrekovania vzoriek (injektor);

– chromatografická kolóna (môže byť inštalovaná v termostate);

- detektor;

– systém zberu a spracovania údajov.

Čerpací systém

Čerpadlá zabezpečujú prívod PF do kolóny pri danej konštantnej rýchlosti. Zloženie mobilnej fázy môže byť konštantné alebo variabilné.

počas analýzy. V prvom prípade sa proces nazýva izokratický,

a v druhom - gradient. Niekedy je inštalovaný pred čerpacím systémom

filtre s priemerom pórov 0,45 µm na filtráciu mobilnej fázy. Moderné

Čerpací systém kvapalinového chromatografu pozostáva z jedného alebo viacerých čerpadiel riadených počítačom. To vám umožňuje zmeniť ko-

stáva PF podľa určitého programu počas gradientovej elúcie. Sme-

Zložky PF v mixéri sa môžu vyskytovať pri nízkom tlaku

lening (pred čerpadlami) a pri vysokom tlaku (za čerpadlami). Miešač je možné použiť na prípravu PP a na izokratickú elúciu,

presnejší pomer zložiek sa však dosiahne predbežným

miešanie zložiek PF pre izokratický proces. Čerpadlá pre analytickú HPLC umožňujú udržiavať konštantný prietok PP do kolóny v rozsahu od 0,1 do 10 ml/min pri tlaku na vstupe kolóny do 50 MPa. Je však vhodné, aby táto hodnota neprekročila

šalo 20 MPa. Tlakové pulzácie sú minimalizované špeciálnym tlmením

železné systémy zahrnuté v konštrukcii čerpadiel. Pracovné diely zapnuté

čerpadlá sú vyrobené z materiálov odolných voči korózii, čo umožňuje použitie agresívnych zložiek v zložení PF.

Miešačky

Miešačky môžu byť svojou konštrukciou statické alebo dynamické

duševný.

V mixéri sa vytvorí jedna mobilná fáza z

samostatné rozpúšťadlá dodávané čerpadlami, ak požadovaná zmes nebola vopred pripravená. Miešanie rozpúšťadiel sa zvyčajne vyskytuje spontánne, ale niekedy sa používajú systémy núteného miešania.

šitie.

Injektory

Injektory môžu byť všestranné na vstrekovanie vzoriek z

1 μl až 2 ml alebo diskrétne na vstreknutie vzorky len určitého objemu

ema. Oba typy vstrekovačov môžu byť automatické („automatické vstrekovače“ alebo „autosamplery“). Injektor na vstrekovanie vzorky (roztoku) nie je umiestnený

priamo pred chromatografickou kolónou. Konštrukcia injektora umožňuje zmeniť smer toku PF a vykonať predbežné vstreknutie vzorky do slučky s určitým objemom (zvyčajne od 10 do 100 μl).

Tento objem je uvedený na štítku pántu. Konštrukcia injektora umožňuje výmenu slučky. Na uvedenie analyzovaného riešenia do neznáma

paradajkový injektor je ručná mikrostriekačka s objemom, ktorý je

výrazne prevyšuje objem slučky. Prebytok injekčného roztoku, nie

v slučke sa vyhodí a do kolóny sa vstrekne presný a vždy rovnaký objem vzorky. Ručné neúplné naplnenie slučky znižuje presnosť

presnosť a reprodukovateľnosť dávkovania, a preto zhoršuje presnosť

a reprodukovateľnosť chromatografickej analýzy.

Chromatografický stĺpec

Chromatografické kolóny sú zvyčajne nerezové, sklenené alebo plastové rúrky naplnené sorbentom a uzavreté

na oboch stranách s filtrami s priemerom pórov 2–5 µm. Analytická dĺžka

kolóna, v závislosti od chromatografického separačného mechanizmu, môže byť v rozsahu od 5 do 60 cm alebo viac (zvyčajne je to

10-25 cm), vnútorný priemer - od 2 do 10 mm (zvyčajne 4,6 mm). V mikrostĺpci chrómu sa používajú kolóny s vnútorným priemerom menším ako 2 mm

tografia. Používajú sa aj kapilárne kolóny s vnútornými priemermi.

rum asi 0,3-0,7 mm. Kolóny pre preparatívnu chromatografiu majú vnútorný priemer do 50 mm alebo viac.

Krátke káble môžu byť inštalované pred analytickou kolónou.

stĺpy (strážne stĺpy) vykonávajúce rôzne pomocné funkcie

(častejšie - ochrana analytickej kolóny). Zvyčajne sa analýza vykonáva pomocou

teplotu, avšak na zvýšenie účinnosti separácie a

skrátenie doby trvania analýzy je možné použiť termostat

tirovanie kolón pri teplotách nie vyšších ako 60 C. Pri vyšších teplotách je možná deštrukcia sorbentu a zmena zloženia PF.

Stacionárna fáza (sorbent)

Zvyčajne sa používajú ako sorbenty:

1. V normálnom prípade sa používa silikagél, oxid hlinitý, porézny grafit

malofázová chromatografia. V tomto prípade prídržný mechanizmus

čaj - zvyčajne adsorpcia;

2. Živice alebo polyméry s kyslými alebo zásaditými skupinami. Oblasť použitia - iónomeničová chromatografia;

3. porézny silikagél alebo polyméry (vylučovacia chromatografia);

4. Chemicky modifikované sorbenty (sorbenty s vrúbľovanými

zami), pripravované najčastejšie na báze silikagélu. Retenčný mechanizmus je vo väčšine prípadov distribúcia medzi

noah a stacionárne fázy;

5. Chemicky modifikované chirálne sorbenty, napr.

vodné celulózy a amylózy, proteíny a peptidy, cyklodextríny,

používa sa na separáciu enantiomérov (chirálna chromatografia

Sorbenty s navrúbľovanými fázami môžu mať rôzne stupne chemického zloženia

technická úprava. Častice sorbentu môžu byť sférické alebo nie

pravidelný tvar a rôzna pórovitosť.

Najčastejšie používané vrúbľované fázy sú:

– oktylových skupín(sorbent oktylsilán alebo C8);

– oktadecylové skupiny(sorbent oktadecylsilán

(ODS) alebo C18);

– fenylové skupiny(fenylsilánový sorbent);

– kyanopropylové skupiny(CN sorbent);

– aminopropylové skupiny(sorbent NH2);

- diolové skupiny (sorbent diol).

Najčastejšie sa analýza vykonáva na nepolárnych vrúbľovaných fázach v

režim s reverznou fázou s použitím sorbentu C18.

V niektorých prípadoch je vhodnejšie použiť normálne

fázová chromatografia. V tomto prípade sa používa silikagél alebo polárne očkované fázy ("CN", "NH2", "diol") v kombinácii s nepolárnymi rozpúšťadlami.

Sorbenty s navrúbľovanými fázami sú chemicky stabilné pri hodnotách pH od 2,0 do 8,0, pokiaľ výrobca neurčí inak.

Častice sorbentu môžu mať guľovitý alebo nepravidelný tvar a rôznu pórovitosť. Veľkosť častíc sorbentu pri analytickej HPLC je zvyčajne 3–10 µm, pri preparatívnej HPLC - až 50 µm alebo viac.

Používajú sa aj monolitické sorbenty.

Vysoká separačná účinnosť je zabezpečená veľkým povrchom častíc sorbentu (čo je dôsledkom ich mikroskopickosti

veľkosť a prítomnosť pórov), ako aj jednotnosť zloženia sorbentu a jeho husté a rovnomerné balenie.

Detektory

Používajú sa rôzne metódy detekcie. Vo všeobecnom prípade PP so zložkami rozpustenými v ňom po chromatografickej kolóne

Ki vstupuje do detektorovej cely, kde sa nachádza jedna z jej vlastností (absorpcia v UV alebo viditeľnej oblasti spektra, fluorescencia,

index lomu, elektrická vodivosť atď.). Výsledný chromatogram je graf závislosti nejakého fyzikálneho

alebo fyzikálno-chemický parameter PF v závislosti od času.

Najbežnejšie sú spektrofotometrické de-

tektorov (vrátane diódovej matrice), ktoré zaznamenávajú zmenu v optike

hustota v ultrafialovom, viditeľnom a často blízkom infračervenom svetle

spektrálne oblasti od 190 do 800 alebo 900 nm. V tomto prípade chromatogram

čaj predstavuje závislosť optickej hustoty PF od času.

Tradične používaný spektrofotometrický detektor umožňuje

Môže vykonávať detekciu pri akejkoľvek vlnovej dĺžke vo svojom pracovnom rozsahu.

zónu. Používajú sa aj detektory s viacerými vlnovými dĺžkami, čo umožňuje

poskytnúť detekciu na niekoľkých vlnových dĺžkach súčasne.

Pomocou detektora diódového poľa je možné vykonávať nielen detekciu na niekoľkých vlnových dĺžkach naraz, ale aj prakticky okamžitú

získať optické spektrum FS v akomkoľvek okamihu (bez skenovania), čo značne zjednodušuje kvalitatívnu analýzu separovaných zložiek.

komponentov.

Citlivosť fluorescenčných detektorov je asi 1000-krát vyššia ako citlivosť spektrofotometrických. V tomto prípade sa použije buď vnútorná fluorescencia alebo fluorescencia zodpovedajúcich derivátov, ak samotná látka, ktorá sa má stanoviť, nefluoreskuje. Moderné

fluorescenčné detektory umožňujú nielen získavanie chromatografických

gramov, ale aj na zaznamenávanie excitačných a fluorescenčných spektier analýzy

spojenia.

Refraktometrické detektory sa používajú na analýzu vzoriek, ktoré neabsorbujú v UV a viditeľnej spektrálnej oblasti (napr. sacharidy).

(refraktometre). Nevýhodou týchto detektorov je ich nízka (v porovnaní so spektrofotometrickými detektormi) citlivosť a značná teplotná závislosť intenzity signálu (detektor musí byť termostatovaný).

Používajú sa aj elektrochemické detektory (konduktometrické

obloha, amperometrická atď.), hmotnostná spektrometria a Fourierova IČ

detektory, detektory rozptylu svetla, rádioaktivita a niektoré ďalšie

Mobilná fáza

V Ako PP je možné použiť rôzne rozpúšťadlá – jednotlivé aj ich zmesi.

V normálna fáza chromatografia zvyčajne používa kvapalný uhlík

levodorody (hexán, cyklohexán, heptán) a iné relatívne nepolárne

rozpúšťadlá s malými prídavkami polárnych organických zlúčenín,

ktoré regulujú elučný výkon PF.

V chromatografii na reverznej fáze obsahuje PF polárny

ganické rozpúšťadlá (zvyčajne acetonitril a metanol) a voda. Pre opt-

separácie často využívajú vodné roztoky s určitým

pH, najmä tlmivé roztoky. Prísady sa používajú anorganické

chemické a organické kyseliny, zásady a soli a iné zlúčeniny (napr

napríklad chirálne modifikátory na separáciu enantiomérov na achirálne

sorbent).

Kontrola hodnoty pH sa musí vykonávať oddelene pre vodnú zložku a nie pre jej zmes s organickým rozpúšťadlom.

PF môže pozostávať z jedného rozpúšťadla, často z dvoch, ak je to potrebné

dosah - tri alebo viac. Zloženie PP je uvedené ako objemový pomer rozpúšťadiel, ktoré sú v ňom obsiahnuté. V niektorých prípadoch mas

pomer, ktorý by mal byť osobitne stanovený.

Pri použití UV spektrofotometrického detektora by PF nemal mať výraznú absorpciu pri vlnovej dĺžke zvolenej na detekciu. Limit priehľadnosti alebo optickej hustoty pri určovaní

často sa uvádza špecifická vlnová dĺžka rozpúšťadla konkrétneho výrobcu

nájdete na obale.

Chromatografická analýza je značne ovplyvnená stupňom čistoty PF, preto je vhodnejšie použiť rozpúšťadlá vyrobené

špeciálne pre kvapalinovú chromatografiu (vrátane vody).

PP a analyzované roztoky by nemali obsahovať nerozpustné

častice a bubliny plynu. Voda získaná v laboratórnych podmienkach

vodné roztoky, vopred zmiešané s vodou, organické roztoky

Prístroje, ako aj analyzované roztoky, musia byť podrobené jemnej filtrácii a odplyneniu. Na tieto účely sa zvyčajne používa filtrácia.

vo vákuu cez membránový filter s veľkosťou pórov 0,45 μm inertný vzhľadom na dané rozpúšťadlo alebo roztok.

Systém zberu a spracovania údajov

Moderný systém spracovania údajov je rozhranie

osobný počítač pripojený k chromatografu s nainštalovaným

softvér, ktorý vám umožňuje registrovať a spracovávať chro-

matogram, ako aj ovládať činnosť chromatografu a monitorovať hl

parametre chromatografického systému.

Zoznam chromatografických podmienok, ktoré treba uviesť

V súkromnej monografii sú veľkosti ko-

kolóny, typ sorbentu s uvedením veľkosti častíc, teplota kolóny (v prípade potreby termostatovanie), objem vstrekovanej vzorky (objem slučky),

stáva PF a spôsob jeho prípravy, rýchlosť posuvu PF, podmienky detektora a detekcie, popis gradientového režimu (ak sa používa), čas chromatografie.

iónová výmena a iónová HPLC

Na analýzu oboch organických látok sa používa iónomeničová chromatografia

(heterocyklické zásady, aminokyseliny, bielkoviny atď.) a inor-

ganické (rôzne katióny a anióny) zlúčeniny. Oddelenie komponentov

Obsah analyzovanej zmesi v iónovo-výmennej chromatografii je založený na reverzibilnej interakcii iónov analyzovaných látok s iónovými skupinami.

pami sorbent. Anionity alebo katión-

vy. Tieto sorbenty sú prevažne buď polymérne iónové

výmenné živice (zvyčajne kopolyméry styrénu a divinylbenzénu s očkovanými

iónové skupiny) alebo silikagély s naočkovanými iónomeničovými skupinami. Sorbenty so skupinami - (СН2) 3 N + X– sa používajú na oddelenie aniónov a sorbenty so skupinami - (СН2) SO3 - Н + sa používajú na oddelenie katiónov.

Zvyčajne sa polymérové živice používajú na oddelenie aniónov a

vylúhovanie katiónov - modifikované silikagély.

Ako PF v iónomeničovej chromatografii sa používajú vodné roztoky kyselín, zásad a solí. Bežne sa používajú vyrovnávacie rasy.

krémy, ktoré umožňujú udržiavať určité hodnoty pH. Je tiež možné použiť malé prísady, organické miešateľné s vodou

chemické rozpúšťadlá - acetonitril, metanol, etanol, tetrahydrofurán.

Iónová chromatografia- variant iónomeničovej chromatografie, v

ktorá na určenie koncentrácie iónov analytu je

používa konduktometrický detektor. Pre vysoko citlivé op-

Stanovenie zmien vo vodivosti prechádzajúcej cez detektor PF, vodivosť pozadia PF by mala byť nízka.

Existujú dve hlavné možnosti iónovej chromatografie.

Prvý z nich je založený na potlačení elektrickej vodivosti elektrolýzy

PF pomocou druhej iónomeničovej kolóny umiestnenej medzi ana-

lytický stĺpec a detektor. V tomto stĺpci dochádza k neutralizácii

PF a analyzované zlúčeniny vstupujú do detekčnej bunky v deiónovej bunke

voda. Detegované ióny sú jediné ióny

poskytujúce PF vodivosť. Nevýhodou supresorovej kolóny je potreba jej regenerácie v pomerne krátkych intervaloch.

ja. Supresorový stĺpik môže byť nahradený kontinuálne pôsobiacim

membránový supresor, v ktorom je zloženie membrány kontinuálne

sa obnovuje prúdením regeneračného roztoku pohybujúcim sa v smere,

proti smeru toku PF.

Druhým variantom iónovej chromatografie je jednostĺpcová iónová chromatografia.

matografia. V tejto verzii je použitý PF s veľmi nízkou elektrickou vodivosťou.

obsah vody. Slabé organické zlúčeniny sa široko používajú ako elektrolyty.

skic kyseliny - benzoová, salicylová alebo izoftalová.

EXKLUZÍVNA HPLC

Veľkostná vylučovacia chromatografia (veľkostná vylučovacia chromatografia) je špeciálny typ HPLC založený na separácii molekúl podľa ich veľkosti. Distribúcia

molekúl medzi stacionárnou a mobilnou fázou je založený na veľkosti mo-

lekuly a čiastočne na ich tvare a polarite. Na oddelenie použite a

porézne sorbenty - polyméry, silikagél, porézne sklá a polysacharidy.

Veľkosť častíc sorbentov je 5–10 µm.

Výhodou poréznych skiel a silikagélu je rýchla difúzia molekúl PP a analytu do pórov, stabilita za rôznych podmienok (aj pri vysokých teplotách). Polymérny sorbén -

ste kopolyméry styrénu a divinylbenzénu (to sú hydro-

fobické sorbenty používané s nepolárnymi mobilnými fázami) a

hydrofilné gély vyrobené zo sulfónovaných divinylbenzénových alebo polyakrylamidových živíc.

Sú možné dva limitujúce typy interakcie molekúl s poréznou stacionárnou fázou. Molekuly, ktorých veľkosť je väčšia ako stredný priemer pórov a, vôbec neprenikajú do sorbentu a sú eluované spolu s mobilnou fázou.

Choď prvý. Molekuly s priemerom oveľa menším ako je veľkosť pórov sor-

benta do nej voľne prenikajú, zostávajú najdlhšie v stacionárnej fáze a sú eluované ako posledné. Stredne veľké molekuly prenikajú do pórov sorbentu v závislosti od veľkosti a čiastočne v závislosti od ich tvaru. Eluujú s rôznymi retenčnými časmi medzi cca-

naše najväčšie a najmenšie molekuly. K separácii zložiek chromatografovanej vzorky dochádza v dôsledku opakovaných ak-

difúziu zložiek vzorky do pórov sorbentu a naopak.

Pri vylučovacej chromatografii na charakterizáciu retencie

používa retenčný objem rovný súčinu prietoku PF a retenčného času.

Mobilná fáza. Výber PP závisí od typu sorbentu. exkluzívne-

Každá chromatografia sa vo všeobecnosti delí na gélovú filtráciu a gélovú filtráciu

penetračná chromatografia.

Na separáciu sa používa metóda gélovej filtračnej chromatografie

vo vode rozpustných zlúčenín na hydrofilných sorbentoch. Mobilné fázy sú vodné tlmivé roztoky s danou hodnotou pH.

Pri gélovej permeačnej chromatografii sa hydrofóbny resp.

ohyby a nepolárne organické rozpúšťadlá (toluén, dichlórmetán, tet-

rahydrofurán). Táto metóda sa používa na analýzu zlúčenín s nízkou rozpustnosťou.

okraj vo vode.

Detektory. Diferenciálne refraktometrické detektory, ako aj spektrofotometrické detektory (vrátane detektorov v infračervenej oblasti spektra) sa používajú ako detektory pri vylučovacej chromatografii.

Používajú sa aj viskozimetrické a prietokové laserové detektory.

Tieto detektory v kombinácii s refraktometrom alebo inou koncentráciou

detektor vám umožňuje nepretržite určovať molekulovú hmotnosť

vápno v PF.

ULTRA ÚČINNÁ KVAPALNÁ CHROMATOGRAFIA

Ultravýkonná kvapalinová chromatografia je variant kvapalinovej chromatografie, ktorý je účinnejší

v porovnaní s klasickou HPLC.

Charakteristickým znakom ultravýkonnej kvapalinovej chromatografie je

Používa sa použitie sorbentov s veľkosťou častíc 1,5 až 2 mikróny. Rozmery chro-

matematické stĺpce majú zvyčajne dĺžku od 50 do 150 mm a od 1

do priemeru 4 mm. Objem vstreknutej vzorky môže byť od 1 do 50 μl.

Chromatografické zariadenia používané v klasickom