Sıvı kromatografisi. Farmasötiklerde yüksek performanslı sıvı kromatografi yönteminin kullanımının özellikleri Yöntemin sıvı kromatografi özü

(esas olarak moleküller arası) arayüzeyde. Bir analiz yöntemi olarak, HPLC, incelenen nesnelerin karmaşıklığı nedeniyle, orijinal karmaşık karışımın nispeten basit olanlara ön ayrılmasını içeren bir grup yöntemin parçasıdır. Elde edilen basit karışımlar daha sonra geleneksel fizikokimyasal yöntemlerle veya kromatografi için geliştirilmiş özel yöntemlerle analiz edilir.

HPLC yöntemi kimya, petrokimya, biyoloji, biyoteknoloji, tıp, gıda endüstrisi, çevre koruma, ilaç üretimi ve daha birçok alanda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Analiz edilen veya ayrılan maddelerin ayrılma mekanizmasına göre, HPLC, adsorpsiyon, dağıtım, iyon değişimi, boyut dışlama, ligand değişimi ve diğerlerine ayrılır.

Pratik çalışmada, ayırmanın genellikle birer birer değil, aynı anda birkaç mekanizma yoluyla gerçekleştiği akılda tutulmalıdır. Bu nedenle, dışlama ayırma, adsorpsiyon etkileri, adsorpsiyon - dağıtım ve bunun tersi ile karmaşıktır. Ayrıca, iyonizasyon derecesi, baziklik veya asitlik, moleküler ağırlık, polarize edilebilirlik ve diğer parametreler açısından numunedeki maddeler arasındaki fark ne kadar büyük olursa, bu tür maddeler için farklı bir ayırma mekanizması olasılığı da o kadar yüksek olur.

Normal faz HPLC

Sabit faz, hareketli olandan daha polardır; bu nedenle, ayrıştırıcının bileşiminde polar olmayan bir çözücü baskındır:

Heksan: izopropanol = 95: 5 (düşük polariteli maddeler için)
Kloroform: metanol = 95: 5 (orta polar maddeler için)
Kloroform: metanol = 80:20 (yüksek polar maddeler için)

Ters faz HPLC

Sabit faz, hareketli fazdan daha az polardır; bu nedenle, eluentte hemen hemen her zaman su bulunur. Bu durumda, mobil fazda BAC'nin tamamen çözünmesini sağlamak her zaman mümkündür, UV algılamayı kullanmak neredeyse her zaman mümkündür, hemen hemen tüm mobil fazlar karşılıklı olarak karıştırılır, gradyan elüsyonu kullanılabilir, kolon hızlı bir şekilde yeniden kullanılabilir. dengelendiğinde, sütun yeniden oluşturulabilir.

Ters fazlı HPLC için tipik eluentler şunlardır:

asetonitril: su
metanol: su
izopropanol: su

HPLC matrisleri

HPLC'de matrisler olarak silika (silis jel) veya alümina gibi inorganik bileşikler veya polistiren (divinilbenzen ile çapraz bağlı) veya polimetakrilat gibi organik polimerler kullanılır. Silika jel elbette günümüzde genel kabul görmektedir.

Matrisin ana özellikleri:

Parçacık boyutu (μm);
İç gözenek boyutu (Å, nm).

HPLC için silika jelin hazırlanması:

Polisilisik asit mikrokürelerinin oluşturulması;
Silika jel parçacıklarının kurutulması;
Hava ayırma.

emici parçacıklar:

Normal (küresel): daha yüksek basınç direnci, daha yüksek maliyet;
Küresel olmayan: daha düşük basınç direnci.

HPLC gözenek boyutu en önemli parametrelerden biridir. Gözenek boyutu ne kadar küçükse, ayrıştırılmış maddelerin molekülleri için geçirgenlikleri o kadar kötü olur. Sonuç olarak, sorbentlerin emme kapasitesi daha kötüdür. Gözenekler ne kadar büyük olursa, ilk olarak, emici parçacıkların mekanik stabilitesi o kadar az olur ve ikinci olarak, sorpsiyon yüzeyi ne kadar küçük olursa, verim o kadar kötü olur.

Sabit faz greftleri

Normal Faz HPLC:

Propil nitril aşılamalı (nitril) sabit faz;
Propilamin aşılamalı (amin) sabit faz.

Ters Fazlı HPLC:

Alkil aşılama ile sabit faz;
Alkilsilil aşılama ile sabit faz.

Uç kapatma - "küçük" moleküller ile ek aşılama yoluyla sorbentin aşılanmamış alanlarının korunması. Hidrofobik uç kapatma (C1, C2): daha yüksek seçicilik, daha kötü ıslanabilirlik; hidrofilik uç kapatma (diol): daha düşük seçicilik, daha yüksek ıslanabilirlik.

HPLC dedektörleri

UV
diyot matrisi
Floresan
elektrokimyasal
refraktometrik
kitle seçici

Bağlantılar

Wikimedia Vakfı. 2010.

kromatografi
bölme kromatografisi

Diğer sözlüklerde "" ne olduğunu görün:

yüksek performanslı sıvı kromatografisi- - [AS Goldberg. İngilizce Rusça Enerji Sözlüğü. 2006] Konular Genel olarak enerji EN yüksek performanslı sıvı kromatografisi HPLC ... Teknik çevirmen kılavuzu

yüksek performanslı sıvı kromatografisi- Yüksek performanslı sıvı kromatografisi terimi İngilizce terimi yüksek performanslı sıvı kromatografisi Eşanlamlılar Kısaltmalar HPLC, HPLC İlgili terimler adsorpsiyon, oligopeptid, proteomik, sorbent, fulleren, endohedral, kromatografi ... ...

YÜKSEK PERFORMANSLI SIVI KROMATOGRAFİSİ- sıvı kromatografisi, ayırma verimliliğini arttırmak için, basınç altında (3x107 Pa'dan fazla) bir çözücü (eluent), küçük çaplı partiküllere (1 μm'ye kadar) ve perfüzyona sahip bir sorbent ile doldurulmuş kolonlardan pompalanır ...

SIVI KROMATOGRAFİSİ- hareketli fazın sıvı (eluent) ve sabit olduğu kromatografi türü. sorbent, televizyon. yüzeyine sıvı veya jel uygulanmış bir taşıyıcı. Bir sorbent (kolon kromatografisi) ile doldurulmuş bir kolonda, düz bir zeminde gerçekleştirilir ... ... Doğal bilim. ansiklopedik sözlük

kromatografi- [κρώμα (υroma) rengi] karışımın tek tek bileşenlerinin (sıvı veya gaz) adsorbanın yüzeyinde hem taşıyıcı akıştan emilirken hem de ... . .. jeolojik ansiklopedi

kromatografi- (diğer Yunancadan ... Wikipedia

kromatografi- kromatografi terimi İngilizce terim kromatografi Eşanlamlılar Kısaltmalar İlgili terimler yüksek performanslı sıvı kromatografisi, klatrat, çip üzerinde laboratuvar, porozimetri, proteom, proteomik, sorbent, enzim, fulleren, endohedral ... ... Nanoteknolojinin Ansiklopedik Sözlüğü

İYON DEĞİŞİM KROMATOGRAFİSİ- ayrışmaya dayalı sıvı kromatografisi. ayrılan iyonların fiksir ile iyon değiştirme yeteneği. ikincisinin iyonojenik gruplarının ayrışmasının bir sonucu olarak oluşan sorbent iyonları. Katyonların ayrılması için katyon değiştiriciler kullanılır, ... ... kimyasal ansiklopedi

HPLC- yüksek performanslı sıvı kromatografisi ... Rus dilinin kısaltmaları sözlüğü

HPLC- Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), hem analitik kimyada hem de kimya teknolojisinde yaygın olarak kullanılan karmaşık madde karışımlarının ayrılması için en etkili yöntemlerden biridir. Kromatografik ayırmanın temeli katılımdır ... Wikipedia

Kitabın

Pratik Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi, Veronica R. Mayer. Modern yöntem ve donanımlarla genişletilen kitabın 5. baskısını okuyucunun beğenisine sunuyoruz. Kitapta pek çok şey geliştirildi ve çok sayıda bağlantı eklendi. Metinde yer alan yerler...

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), hareketli fazın (PF), sabit bir faz (sorbent) ile doldurulmuş bir kromatografik kolon boyunca hareket eden bir sıvı olduğu bir kolon kromatografisi tekniğidir. HPLC kolonları, kolonun girişinde yüksek hidrolik basınçlara sahiptir, bu nedenle HPLC'ye bazen "yüksek basınçlı sıvı kromatografisi" denir.

Maddelerin ayrılma mekanizmasına bağlı olarak, aşağıdaki HPLC seçenekleri ayırt edilir: adsorpsiyon, dağıtım, iyon değişimi, boyut dışlama, kiral, vb.

Adsorpsiyon kromatografisinde, maddelerin ayrılması, gelişmiş bir yüzeye, örneğin silika jele sahip bir adsorbanın yüzeyinden adsorbe etme ve desorbe etme konusundaki farklı yetenekleri nedeniyle meydana gelir.

HPLC dağıtımında, ayrılacak maddelerin sabit (genellikle sabit taşıyıcının yüzeyine kimyasal olarak aşılanmış) ve hareketli fazlar arasındaki dağılım katsayılarının farklı olması nedeniyle ayrılma meydana gelir.

PP ve NF'nin polaritesine göre HPLC, normal faz ve ters faz olarak ikiye ayrılır.

Normal fazlı kromatografi, polar bir sorbent (örneğin, NH2 - veya CN grupları ile aşılanmış silika jel veya silika jel) ve polar olmayan PP (örneğin, çeşitli katkı maddeleri ile heksan) kullanan bir kromatografi çeşididir. Ters faz kromatografisi, polar olmayan kimyasal olarak modifiye edilmiş emiciler (örneğin, polar olmayan bir C18 alkil radikali) ve polar hareketli fazlar (örneğin metanol, asetonitril) kullanır.

İyon değişim kromatografisinde, çözeltide katyonlara ve anyonlara ayrışan karışım maddelerinin molekülleri, sorbentin iyonik grupları ile farklı değişim oranları nedeniyle sorbent (katyon veya anyon) boyunca hareket ederken ayrılır.

Boyut dışlama (elek, jel geçirgenliği, jel filtrasyonu) kromatografisinde, maddelerin molekülleri, sabit fazın gözeneklerine farklı nüfuz etme yetenekleri nedeniyle boyutlarına göre ayrılır. Bu durumda, durağan fazın minimum gözeneklerine nüfuz edebilen en büyük moleküller (en yüksek moleküler ağırlığa sahip) kolondan ilk ayrılanlardır ve küçük moleküler boyutlu maddeler en son ayrılanlardır.

çoğu zaman, ayırma birer birer değil, aynı anda birkaç mekanizma yoluyla ilerler.

HPLC, herhangi bir gaz olmayan analitin kalitesini kontrol etmek için kullanılabilir. Analiz için uygun aletleri kullanın - sıvı kromatograflar.

Bir sıvı kromatografın bileşimi genellikle aşağıdaki ana bileşenleri içerir:

- Mobil fazlı bir kap (veya mobil fazın parçası olan ayrı çözücüler içeren kaplar) ve bir PF gaz giderme sistemi içeren PF hazırlama ünitesi;

- pompalama sistemi;

- mobil fazlı karıştırıcı (gerekirse);

- numune enjeksiyon sistemi (enjektör);

- kromatografik kolon (bir termostata monte edilebilir);

- dedektör;

- veri toplama ve işleme sistemi.

pompalama sistemi

Pompalar, belirli bir sabit hızda kolona PF beslemesi sağlar. Mobil fazın bileşimi, analiz sırasında sabit olabilir veya değişebilir. İlk durumda, sürece izokratik, ikincisinde ise gradyan denir. 0,45 μm gözenek çapına sahip filtreler bazen hareketli fazı filtrelemek için pompalama sisteminin önüne monte edilir. Modern bir sıvı kromatograf pompalama sistemi, bir bilgisayar tarafından kontrol edilen bir veya daha fazla pompadan oluşur. Bu, gradyan elüsyonu sırasında IF'nin bileşimini belirli bir programa göre değiştirmeyi mümkün kılar. PF bileşenlerinin karıştırıcıda karıştırılması hem düşük basınçta (pompalardan önce) hem de yüksek basınçta (pompalardan sonra) gerçekleşebilir. Karıştırıcı, PP'nin hazırlanması ve izokratik elüsyon için kullanılabilir, ancak daha doğru bir bileşen oranı, izokratik işlem için PP bileşenlerinin önceden karıştırılmasıyla elde edilir. Analitik HPLC için pompalar, kolon girişinde 50 MPa'ya kadar bir basınçta 0,1 ila 10 ml / dak aralığında kolona sabit bir PP akış hızının korunmasına izin verir. Ancak bu değerin 20 MPa'yı geçmemesi tavsiye edilir. Pompa tasarımında yer alan özel sönümleme sistemleri ile basınç titreşimleri en aza indirilmiştir. Pompaların çalışma parçaları, PF bileşiminde agresif bileşenlerin kullanılmasına izin veren korozyona dayanıklı malzemelerden yapılmıştır.

"Doğal ve atık su kirleticilerinin yüksek performanslı sıvı kromatografisi"

Tanıtım

Bölüm 1. Sıvı kromatografi yöntemlerinin temel kavramları ve sınıflandırılması

1.1 Sıvı kromatografisi için aparat

Bölüm 2. HPLC'nin özü

2.1 Uygulama

Bölüm 3. Çevresel nesnelerin analizinde HPLC kullanımına ilişkin örnekler

Bölüm 4. HPLC Ekipmanı

Edebiyat

Tanıtım

kromatografik yöntemler benzer bir yapıya sahip organik maddelerin tanımlanması ve miktarının belirlenmesi için genellikle vazgeçilmezdir. Aynı zamanda, çevresel kirleticilerin rutin analizi için en yaygın olarak kullanılan gaz ve yüksek performanslı sıvı kromatografisidir. İçme ve atık sulardaki organik kirleticilerin gaz kromatografik analizi ilk olarak dolgulu kolonların kullanımına dayanıyordu, daha sonra kuvars kılcal kolonlar da yaygınlaştı. Kılcal kolonların iç çapı genellikle 0.20-0.75 mm'dir, uzunluk 30-105 m'dir.Sudaki kirleticilerin analizinde en iyi sonuçlar, fenil grupları içeren metilfenilsilikonlardan yapılmış farklı film kalınlıklarına sahip kılcal kolonlar kullanıldığında çoğunlukla elde edilir. %5 ve %50... Numune giriş sistemi, genellikle kapiler kolonlar kullanan kromatografik tekniklerde bir güvenlik açığı haline gelir. Örnek tanıtım sistemleri iki gruba ayrılabilir: evrensel ve seçici. Çok yönlü uygulamalar arasında split ve splitless enjeksiyon sistemleri, "soğuk" kolon enjeksiyonu ve sıcaklık programlı buharlaştırma yer alır. Seçici enjeksiyon ile ara yakalama ile üfleme, headspace analizi vb. Üniversal enjeksiyon sistemlerini kullanırken, örneğin tamamı kolona verilir; seçici enjeksiyon ile sadece belirli bir fraksiyon enjekte edilir. Kolona giren fraksiyon sadece uçucu maddeler içerdiğinden ve teknik tamamen otomatikleştirilebildiğinden seçici enjeksiyon ile elde edilen sonuçlar çok daha doğrudur.

Kirleticilerin izlenmesinde kullanılan gaz kromatografik dedektörler genellikle mobil fazdaki her bileşene yanıt veren evrensel dedektörler ve mobil fazda benzer kimyasal özelliklere sahip belirli bir madde grubunun varlığına yanıt veren seçici dedektörler olarak ikiye ayrılır. Evrensel olanlar alev iyonizasyonu, atomik emisyon, kütle spektrometrik dedektörleri ve kızılötesi spektrometriyi içerir. Su analizinde kullanılan seçici dedektörler elektron yakalama (halojen atomları içeren maddelere seçici), termoiyonik (azot ve fosfor içeren bileşiklere seçici), fotoiyonizasyon (aromatik hidrokarbonlara seçici), elektrolitik iletkenlik dedektörü (halojen atomları içeren bileşiklere seçici) , kükürt ve azot). Minimum tespit edilebilir madde miktarı nanogramdan saniyede pikograma kadardır.

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi(HPLC), gaz kromatografisi ile analiz edilemeyen çok sayıda termal olarak kararsız bileşiğin belirlenmesi için ideal bir yöntemdir. Metil karbonatlar ve organofosfat insektisitler ve diğer uçucu olmayan maddeler dahil olmak üzere modern tarım kimyasalları, genellikle sıvı kromatografisi ile analiz nesneleri haline gelir. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, çevresel izlemede kullanılan diğer yöntemler arasında popülerlik kazanmaktadır, çünkü aynı zamanda numune hazırlama otomasyonu açısından parlak umutları vardır.

BÖLÜM 1. TEMEL KAVRAMLAR VE SIVI KROMATOGRAFİSİ YÖNTEMLERİNİN SINIFLANDIRILMASI

Sıvı kromatografisi, sabit faz desteğinin tipine bağlı olarak birkaç sınıfa ayrılır. Kağıdın basit donanım tasarımı ve ince tabaka kromatografisi, bu yöntemlerin analitik uygulamada yaygın olarak kullanılmasına yol açmıştır. Bununla birlikte, sıvı kolon kromatografisinin büyük olanakları, bu klasik yöntem için ekipmanın geliştirilmesini teşvik etti ve HPLC'nin hızlı bir şekilde tanıtılmasına yol açtı. Eluentin kolondan yüksek basınç altında geçirilmesi, analiz hızını önemli ölçüde artırmayı ve ince bir şekilde dağılmış bir sorbent kullanılması nedeniyle ayırma verimliliğini önemli ölçüde artırmayı mümkün kıldı. HPLC yöntemi şu anda organik bileşiklerin karmaşık karışımlarını izole etmeyi, nicel ve nitel olarak analiz etmeyi mümkün kılmaktadır.

Ayrıştırılacak maddenin (elüat) durağan faz ile etkileşim mekanizmasına göre adsorpsiyon, dağılım, iyon değişimi, boyut dışlama, iyon çifti, ligand değişimi ve afinite kromatografisi ayırt edilir.

adsorpsiyon kromatografisi... Adsorpsiyon kromatografisi ile ayırma, ayrılacak maddenin yüzeyde aktif polar merkezleri olan alümina veya silika jel gibi bir adsorban ile etkileşimi sonucunda gerçekleştirilir. Çözücü (eluent) polar olmayan bir sıvıdır. Sorpsiyon mekanizması, sorbentin polar yüzeyi ile analiz edilen bileşenin moleküllerinin polar (veya polarizasyon yapabilen) bölgeleri arasındaki spesifik etkileşimden oluşur (Şekil 1).

Pirinç. 1. Adsorpsiyon sıvı kromatografisi.

bölme kromatografisi... Sıvı kromatografisinin dağıtım varyantında, bir madde karışımının ayrılması, karışmayan iki faz - eluent (hareketli faz) ve sorbent üzerindeki faz (sabit faz) arasındaki dağılım katsayılarındaki fark nedeniyle gerçekleştirilir.

saat normal faz Dağıtım sıvı kromatografisinin bir varyantında, sorbentin (çoğunlukla silika jel) yüzeyine aşılanmış polar olmayan bir eluent ve polar gruplar kullanılır. Nitril, amino grupları vb. gibi polar gruplar içeren ikame edilmiş alkilklorosilanlar, silika jel yüzeyinin değiştiricileri olarak kullanılır (aşılı fazlar) (Şekil 2). Aşılı fazların kullanımı, sabit faz yüzeyinin sorpsiyon özelliklerini hassas bir şekilde kontrol etmeyi ve yüksek ayırma verimi elde etmeyi mümkün kılar.

Pirinç. 2. Aşılanmış fazlı bölme kromatografisi (normal faz varyantı).

Ters evre sıvı kromatografisi, sorbent yüzeyine aşılanmış polar eluent ve polar olmayan gruplar (uzun alkil zincirleri) arasındaki karışım bileşenlerinin dağılımına dayanır (Şekil 3).

Pirinç. 3. Aşılı faz ayırma kromatografisi (ters faz versiyonu).

Desteklenen fazlar ile sıvı kromatografisinin daha az kullanılan bir versiyonu, sabit bir destek üzerinde sıvı bir sabit fazın biriktirilmesidir.

Özel (jel nüfuz eden) kromatografi, sıvı kromatografisinin bir çeşididir, burada maddelerin ayrılması, moleküllerin sorbentin gözeneklerindeki çözücü ile parçacıkları arasında akan çözücü arasındaki dağılımı nedeniyle meydana gelir.

afin kromatografi, proteinlerle seçici olarak kompleksler (konjugatlar) oluşturan, sorbent (sentetik reçine) yüzeyine aşılanmış maddeler (antijenler) ile ayrılmış proteinlerin (antikorların) spesifik etkileşimlerine dayanır.

İyon değişimi, iyon çifti, ligand değişim kromatografisi esas olarak inorganik analizlerde kullanılır.

Kromatografik ayırmanın temel parametreleri.

Kromatografik ayırmanın ana parametreleri, karışım bileşeninin alıkonma hacmi ve alıkonma süresidir (Şekil 4).

Tutma süresi tR, örneğin kolona enjekte edildiği andan karşılık gelen pikin maksimumu ortaya çıkana kadar geçen süredir. Tutma süresini eluent hacimsel hız F ile çarparak, tutma hacmini VR elde ederiz:

Düzeltilmiş alıkonma süresi - emilmemiş bileşenin maksimum zirvesinin ortaya çıktığı andan ilgili bileşiğin zirvesine kadar geçen süre:

tR "= tR - t0 ;

Azaltılmış veya düzeltilmiş alıkonma hacmi, kolon ölü hacmi V0 için düzeltilmiş alıkonma hacmidir, yani emilmemiş bileşenin alıkonma hacmi:

VR "= VR - V0;

Tutma özelliği aynı zamanda sabit fazdaki maddenin kütlesinin hareketli fazdaki maddenin kütlesine oranı olarak tanımlanan kapasite katsayısı k "'dir: k" = mn / mp;

k "değerini kromatogramdan belirlemek kolaydır:

Kromatografik ayırmanın en önemli parametreleri verimliliği ve seçiciliğidir.

Teorik plakaların yüksekliği (HETT) ile ölçülen ve sayılarıyla (N) ters orantılı olarak kolonun verimliliği, aynı alıkonma zamanında çıkan maddenin tepe noktası ne kadar dar olursa o kadar yüksek olur. Verimlilik değeri, aşağıdaki formül kullanılarak kromatogramdan hesaplanabilir:

N = 5.54. (tR / 1/2) 2,

nerede tr- tutma süresi,

w 1/2 - yarım yükseklikte tepe genişliği

Kolon başına teorik plaka sayısını, kolon uzunluğunu L ve ortalama emici tane çapı dc'yi bilerek, teorik plakaya (HETT) ve azaltılmış yüksekliğe (PVETT) eşdeğer yükseklik değerlerini elde etmek kolaydır:

VETT = L / N PVETT = VETT / dc

Bu özellikler, sorbentin kalitesini ve kolonları doldurma kalitesini değerlendirerek farklı tipteki kolonların verimliliğini karşılaştırmaya izin verir.

İki maddenin ayrılmasının seçiciliği denklem ile belirlenir:

İki bileşenli bir karışımın ayrılması düşünüldüğünde, önemli bir parametre de ayırma derecesi RS'dir:

;

RS değeri 1.5'e eşit veya daha büyükse, piklere izin verildiği kabul edilir.

Ana kromatografik parametreler, çözünürlük için aşağıdaki denklemle bağlantılıdır:

;

Ayırma seçiciliğini belirleyen faktörler şunlardır:

1) sorbentin kimyasal yapısı;

2) çözücünün ve değiştiricilerinin bileşimi;

3) ayrılacak karışımın bileşenlerinin kimyasal yapısı ve özellikleri;

4) kolon sıcaklığı

1.1 Sıvı kromatografisi için aparat

Modern sıvı kromatografisinde, en basit sistemlerden çeşitli ek cihazlarla donatılmış yüksek sınıf kromatograflara kadar değişen derecelerde karmaşıklığa sahip cihazlar kullanılır.

İncirde. 4. Herhangi bir kromatografik sistemde mevcut olan, şu veya bu şekilde gerekli minimum bileşen setini içeren bir sıvı kromatografın blok şeması sunulmaktadır.

Pirinç. 4. Bir sıvı kromatografın blok diyagramı.

Pompa (2), sabit bir solvent akışı oluşturacak şekilde tasarlanmıştır. Tasarımı öncelikle sistemdeki çalışma basıncı tarafından belirlenir. 10-500 MPa aralığında çalışması için pistonlu (şırınga) veya pistonlu tip pompalar kullanılmaktadır. İlkinin dezavantajı, eluent ile doldurmak için periyodik olarak durma ihtiyacı ve ikincisinin tasarımın büyük karmaşıklığı ve sonuç olarak yüksek fiyattır. 1-5 MPa'lık düşük çalışma basınçlarına sahip basit sistemler için ucuz peristaltik pompalar başarıyla kullanılmaktadır, ancak sabit basınç ve akış hızı elde etmek zor olduğu için kullanımları hazırlık görevleriyle sınırlıdır.

Enjektör (3), ayrılacak bileşenlerden oluşan bir karışım numunesinin kolona yeterince yüksek tekrarlanabilirlikle enjekte edilmesini sağlar. Basit akış durdurma örnekleme sistemleri bir pompa durdurma gerektirir ve bu nedenle Reodyne döngü dağıtıcılarından daha az uygundur.

HPLC kolonları (4), yüksek basınca dayanabilen kalın duvarlı paslanmaz çelik borulardır. Emici madde ile kolon dolgusunun yoğunluğu ve homojenliği önemli bir rol oynar. Düşük basınçlı sıvı kromatografisi için kalın duvarlı cam kolonlar başarıyla kullanılmıştır. Sıcaklık sabitliği bir termostat (5) ile sağlanır.

Sıvı kromatografisi için dedektörler (6), içinde akan eluentin bazı özelliklerinin sürekli olarak ölçüldüğü bir akış hücresine sahiptir. Genel amaçlı dedektörlerin en popüler türleri, kırılma indisini ölçen refraktometreler ve sabit bir dalga boyunda (genellikle ultraviyole bölgesinde) bir çözücünün absorbansını ölçen spektrofotometrik dedektörlerdir. Refraktometrelerin avantajları (ve spektrofotometrelerin dezavantajları), kromofor grupları içermeyen, belirlenmekte olan bileşik tipine karşı düşük hassasiyet içerir. Öte yandan, refraktometrelerin kullanımı izokratik sistemlerle sınırlıdır (sabit bir eluent bileşimi ile), bu durumda bir çözücü gradyanının kullanılması mümkün değildir.

Çevresel kirleticilerin analizinde en yaygın olarak kullanılan HPLC kolonları, 25 cm uzunluğunda ve 4.6 mm iç çapta olup, aşılı oktadesil grupları ile 5-10 µm boyutunda küresel silika jel partikülleri ile doldurulmuştur. Son yıllarda, daha küçük partiküllerle dolu daha küçük iç çapa sahip kolonlar ortaya çıkmıştır. Bu tür kolonların kullanılması, çözücü tüketiminde ve analiz süresinde azalmaya, ayırma hassasiyeti ve verimliliğinde bir artışa yol açar ve ayrıca kolonların spektral dedektörlere bağlanması problemini kolaylaştırır. 3,1 mm iç çapa sahip kolonlar, servis ömrünü uzatmak ve analizlerin tekrarlanabilirliğini iyileştirmek için bir güvenlik kartuşu (ön kolon) ile donatılmıştır.

Modern HPLC cihazlarında dedektörler olarak, genellikle bir diyot matrisi üzerinde bir UV dedektörü, floresan ve elektrokimyasal kullanılır.

Pratikte, en yaygın olanı, durağan fazın polar olmadığı, mobil fazın polar olduğu (yani, "doğrudan faz" kromatografisinin tersi) "ters faz" (dağıtım) kromatografisidir.

Dünyadaki çoğu laboratuvarda, 16 öncelikli PAH grubu HPLC veya CMS ile analiz edilir.

BÖLÜM 2. HPLC'NİN ÖZÜ

Yüksek performanslı sıvı kromatografisinde (HPLC), kromatografik bir kolonda meydana gelen proseslerin doğası genellikle gaz kromatografisindeki proseslerle aynıdır. Tek fark, bir sıvının sabit bir faz olarak kullanılmasıdır. Sıvı mobil fazların yüksek yoğunluğu ve yüksek kolon direnci nedeniyle, gaz ve sıvı kromatografisi donanım tasarımlarında büyük farklılıklar gösterir.

HPLC'de mobil fazlar olarak genellikle saf çözücüler veya bunların karışımları kullanılır.

Sıvı kromatografide eluent olarak adlandırılan bir saf çözücü (veya çözücü karışımları) akışı oluşturmak için kromatografın hidrolik sisteminde pompalar kullanılır.

Adsorpsiyon kromatografisi, bir maddenin yüzeyde aktif merkezleri olan silika jel veya alümina gibi adsorbanlarla etkileşimi sonucunda gerçekleştirilir. Farklı numune moleküllerinin adsorpsiyon merkezleriyle etkileşime girme yeteneğindeki fark, kolon boyunca hareketli faz ile hareket sırasında bölgelere ayrılmalarına yol açar. Bu durumda elde edilen bileşenlerin bölgelerinin ayrılması, hem çözücü hem de adsorban ile etkileşime bağlıdır.

Farklı hacimlere, yüzeylere ve gözenek çaplarına sahip silika jel adsorbanları, HPLC'de en yaygın şekilde kullanılır. Alümina ve diğer adsorbanlar çok daha az kullanılır. Bunun ana nedeni:

HPLC için tipik olan yüksek basınçlarda paketlemeye ve kullanıma izin vermeyen yetersiz mekanik dayanım;

silika jel, alüminyum oksit ile karşılaştırıldığında, daha geniş bir gözeneklilik, yüzey alanı ve gözenek çapı aralığına sahiptir; alüminyum oksidin önemli ölçüde daha yüksek katalitik aktivitesi, numune bileşenlerinin ayrışması veya bunların geri döndürülemez kimyasal soğurulması nedeniyle analiz sonuçlarının bozulmasına yol açar.

HPLC dedektörleri

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), herhangi bir nedenle gaz kromatografisi için uygun bir forma dönüştürülemeyen, türevleri şeklinde bile olsa, polar uçucu olmayan maddeleri tespit etmek için kullanılır. Bu maddeler, özellikle sülfonik asitleri, suda çözünür boyaları ve fenil-üre türevleri gibi bazı pestisitleri içerir.

Dedektörler:

UV - diyot dizisi dedektörü. Fotodiyotların "matrisi" (iki yüzden fazla vardır) UV ve görünür spektral bölgelerdeki sinyalleri sürekli olarak kaydeder, böylece tarama modunda UV-B spektrumlarının kaydedilmesini sağlar. Bu, özel bir hücreden hızla geçen bileşenlerin bozulmamış spektrumlarını sürekli olarak yüksek hassasiyette kaydetmeyi mümkün kılar.

Zirvenin "saflığı" hakkında bilgi sağlamayan tek bir dalga boyunda algılama ile karşılaştırıldığında, diyot dizisinin tam spektrumunu karşılaştırma imkanı, çok daha yüksek derecede güvenilirlik ile bir tanımlama sonucu sağlar.

Floresan dedektörü. Floresan dedektörlerin büyük popülaritesi, çok yüksek seçicilik ve hassasiyetten ve birçok çevresel kirleticinin floresan (örneğin, poliaromatik hidrokarbonlar) olması gerçeğinden kaynaklanmaktadır.

Kolayca oksitlenen veya indirgenen maddeleri tespit etmek için bir elektrokimyasal dedektör kullanılır: fenoller, merkaptanlar, aminler, aromatik nitro ve halojen türevleri, keton aldehitler, benzidinler.

PP'nin yavaş ilerlemesi nedeniyle kolondaki karışımın kromatografik olarak ayrılması uzun zaman alır. İşlemi hızlandırmak için kromatografi basınç altında gerçekleştirilir. Bu yönteme yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) denir.

Klasik sıvı kolon kromatografisinde kullanılan ekipmanın modernizasyonu, onu en umut verici ve modern analiz yöntemlerinden biri haline getirdi. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, hem düşük hem de yüksek moleküler ağırlıklı uçucu olmayan termolabil bileşiklerin ayrılması, hazırlayıcı izolasyonu ve kalitatif ve kantitatif analizi için uygun bir yöntemdir.

Bu yöntemde kullanılan sorbent tipine bağlı olarak, 2 kromatografi seçeneği kullanılır: polar olmayan bir eluent kullanan bir polar sorbent üzerinde (doğrudan faz seçeneği) ve polar bir eluent kullanan polar olmayan bir sorbent üzerinde - ters çevrilmiş olarak adlandırılır- faz yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC).

Eluent, eluent'e geçtiğinde, HPLC koşulları altındaki denge, polar sorbentler ve susuz PP'lerin koşullarına göre birçok kez daha hızlı kurulur. Bunun bir sonucu olarak, sulu ve sulu-alkolik eluentlerle çalışmanın rahatlığının yanı sıra Off-HPLC, günümüzde büyük popülerlik kazanmıştır. Çoğu HPLC analizi bu yöntem kullanılarak gerçekleştirilir.

Dedektörler. Ayrı bir bileşenin sütunundan çıkışın kaydı, bir dedektör kullanılarak gerçekleştirilir. Kayıt için, mobil fazdan gelen ve karışım bileşeninin doğası ve miktarı ile ilişkili herhangi bir analitik sinyalde bir değişiklik kullanabilirsiniz. Sıvı kromatografisinde, çıkış çözeltisinin ışık absorpsiyonu veya ışık emisyonu (fotometrik ve florometrik dedektörler), kırılma indisi (refraktometrik dedektörler), potansiyel ve elektriksel iletkenlik (elektrokimyasal dedektörler) gibi analitik sinyaller kullanılır.

Sürekli olarak algılanan sinyal bir kaydedici tarafından kaydedilir. Kromatogram, karışımın tek tek bileşenleri kolondan ayrıldığında oluşturulan, kayıt cihazı bandına kaydedilen dedektör sinyallerinin bir dizisidir. Karışımın ayrılması durumunda, harici kromatogramda ayrı ayrı pikler görülebilir. Zirvenin kromatogram üzerindeki konumu, tanımlama amacıyla, tepenin yüksekliği veya alanı, niceleme amacıyla kullanılır.

2.1 Uygulama

HPLC en yaygın olarak aşağıdaki kimyasal analiz alanlarında kullanılmaktadır (HPLC'nin neredeyse hiçbir rekabeti olmadığı durumlarda analiz nesneleri vurgulanmıştır):

· Gıda kalite kontrolü - tonik ve tatlandırıcı katkı maddeleri, aldehitler, ketonlar, vitaminler, şekerler, boyalar, koruyucular, hormonlar, antibiyotikler, triazin, karbamat ve diğer pestisitler, mikotoksinler, nitrozaminler, polisiklik aromatik hidrokarbonlar, vb.

· Çevre koruma - fenoller, organik nitro bileşikleri, mono- ve polisiklik aromatik hidrokarbonlar, bir dizi pestisit, ana anyonlar ve katyonlar.

· Adli bilim - ilaçlar, organik patlayıcılar ve boyalar, güçlü ilaçlar.

· İlaç endüstrisi - steroid hormonları, hemen hemen tüm organik sentez ürünleri, antibiyotikler, polimer preparatları, vitaminler, protein preparatları.

· İlaç - hastalıkları teşhis ederken biyolojik sıvılarda (amino asitler, pürinler ve pirimidinler, steroid hormonları, lipitler) listelenen biyokimyasal ve tıbbi maddeler ve metabolitleri, bireysel dozajları için ilaçların vücuttan atılma oranını belirler.

· Tarım - Uygulanan gübre miktarının belirlenmesi için topraklarda nitrat ve fosfat tayini, yemin besin değerinin (amino asitler ve vitaminler) tespiti, toprak, su ve tarım ürünlerinde pestisit analizleri.

Biyokimya, biyoorganik kimya, genetik mühendisliği, biyoteknoloji - şekerler, lipitler, steroidler, proteinler, amino asitler, nükleositler ve bunların türevleri, vitaminler, peptitler, oligonükleotitler, porfirinler vb.

· Organik kimya - tüm kararlı organik sentez ürünleri, boyalar, ısıya dayanıklı bileşikler, uçucu olmayan bileşikler; inorganik kimya (iyonlar ve kompleks bileşikler şeklinde hemen hemen tüm çözünür bileşikler).

· Üretimlerinin tüm aşamalarında gıda ürünleri, alkollü ve alkolsüz içecekler, içme suları, ev kimyasalları, parfümlerin kalite kontrolü ve güvenliği;

· İnsan kaynaklı bir afet veya acil durum sahasındaki kirliliğin niteliğinin belirlenmesi;

· Narkotik, güçlü, zehirli ve patlayıcı maddelerin tespiti ve analizi;

· İşletmelerden kaynaklanan sıvı atıklar, hava emisyonları ve katı atıklarda ve canlı organizmalarda zararlı maddelerin (polisiklik ve diğer aromatik hidrokarbonlar, fenoller, pestisitler, organik boyalar, ağır, alkalin ve alkalin toprak metallerinin iyonları) varlığının belirlenmesi;

· Organik sentez süreçlerinin, petrol ve kömür rafinerisinin, biyokimyasal ve mikrobiyolojik endüstrilerin izlenmesi;

gübreleme için toprağın kalitesinin, toprakta, suda ve ürünlerde pestisit ve herbisitlerin varlığının yanı sıra yemin besin değerinin analizi; karmaşık araştırma analitik görevleri; eser miktarda ultra saf madde elde etmek.

BÖLÜM 3. ÇEVRESEL OBJELERİN ANALİZİNDE HPLC KULLANIM ÖRNEKLERİ

HPLC - çevresel nesnelerdeki PAH'ları izlemek için bir yöntem

Polisiklik aromatik hidrokarbonlar (PAH'ler), 1. tehlike sınıfının ekotoksik maddeleri için, doğal nesnelerde son derece düşük seviyelerde izin verilen maksimum konsantrasyonlar (MPC) belirlenmiştir. MPC düzeyinde ve altında PAH'ların belirlenmesi, çok karmaşık analitik görevlerden biridir ve bunları çözmek için yüksek teknoloji analiz yöntemleri (GC-MS, GC, HPLC) kullanılır. İzleme için bir yöntem seçerken, dikkate alınan ana özelliklere - duyarlılık ve seçicilik, hız ve ekonomi eklenir, çünkü izleme, bir seri analizi içerir. Kısa, küçük çaplı kolonlardaki HPLC seçeneği, bu gereksinimleri büyük ölçüde karşılar. Bu yöntemi kullanarak, yazarlar üç doğal ortamda benzo [a] pireni izlemek için yöntemler geliştirdiler ve onayladılar: aerosol, kar örtüsü ve yüzey suları. Teknikler şunlarla karakterize edilir: PAH'ların organik çözücüler ile ekstraksiyonu ve ekstrakt konsantrasyonu dahil olmak üzere basit birleştirilmiş numune hazırlama, konsantre ekstraktın kromatografik kolona doğrudan eklenmesi, UV bölgesinde çok dalga boylu fotometrik algılamanın kullanılması. spektrum, kromatogramlarda iki parametre, alıkonma süresi ve spektral oran kullanılarak PAH tepe noktalarının tanımlanması... Aerosolde benzo [a] piren'i 0,3 ila 450 ng / m3 konsantrasyon aralığında, yüzey sularında 10 ila 1000 ng / L konsantrasyon aralığında, kar örtüsünde belirlerken toplam hata% 10'u geçmez. 0,5 ila 50 μg / m2 arasında yüzey yoğunluğu aralığı. Öncelikli PAH'ların (12 bileşiğe kadar) eşzamanlı belirlenmesi ve analitlerin homojen olmayan piklerinin kaydedilmesi durumunda, ekstrenin mobil fazın seçiciliğinde, algılama dalga boyunda ve kolon sıcaklığında bir değişiklikle yeniden ayrılması önerilir, belirlenen PAH'ın bireysel özelliklerini dikkate alarak.

1 ... Ortam hava kalitesi. Benzo [a] pirenin kütle konsantrasyonu. HPLC ölçüm tekniği. Onay sertifikası MVI No. 01-2000.

2 ... Yüzey kalitesi ve arıtılmış atık su. Benzo [a] pirenin kütle konsantrasyonu. HPLC ölçüm tekniği. Onay belgesi MVI No. 01-2001.

3 ... Kar kalitesi. Benzo [a] pirenin kütle konsantrasyonu. HPLC ölçüm tekniği. Onay belgesi MVI No. 02-2001.

Haddelenmiş bakır tortusunun atık alümotermal indirgemesi kullanılarak sulu çözeltilerden anilinin uzaklaştırılması

Hidrokarbonların atık sudan uzaklaştırılması sorunu acil bir iştir. Birçok kimya, petrokimya ve diğer endüstrilerde toksik maddeler olan anilin ve türevleri oluşur. Anilin oldukça toksik bir maddedir, maksimum konsantrasyon limiti 0.1 mg/m3'tür. Anilin ve türevleri suda çözünür ve bu nedenle yerçekimi ile çökeltme ile uzaklaştırılamaz.

Atıksuyu organik kirleticilerden arındırmanın en iyi yöntemlerinden biri, yenilenebilen (alüminosilikatlar, modifiye killer, ahşap, lifler, vb.) ve yenilenemeyen (aktif karbon, makro gözenekli polimer malzemeler, vb.) inorganik ve organik adsorbanların kullanılmasıdır. . ).

Rejenere adsorbanlar, farklı polaritelerdeki organik maddeleri sudan çıkarabilir. Etkili adsorbanların aranması acil bir iştir.

Bu rapor, Erivan Kablo Fabrikasının (OPMOERKZ) haddelenmiş bakır ölçeğinin anilin sorbentleri olarak uygulanması alanındaki bir çalışmanın sonuçlarını sunmaktadır.

Kromatografik çalışmalar, bir HPLC kromatografı / yüksek performanslı sıvı kromatografisi / sistemleri (Waters 486 - dedektör, Waters 600S - kontrolör, Waters 626 - Pompa), incelenen sorbentlerle doldurulmuş 250 x 4 mm'lik bir kolonda, mobil faz hızı 1 ml/m/mobil faz araştırdığımız çözücülerdir/, dedektör UV-254'tür. UV spektroskopik analizi, bir Specord-50 spektrofotometre üzerinde gerçekleştirildi, spektrumlar ASPECT PLUS bilgisayar programı kullanılarak elde edildi.

Tam olarak tartılmış sorbent kısımları, başlangıç konsantrasyonları farklı olan su içindeki belirli hacimlerdeki anilinlere ilave edildi. Karışım 6 saat boyunca iyice çalkalandı, ardından numune çökmeye bırakıldı. Adsorpsiyon 48 saat içinde pratik olarak tamamlanır Çöken anilin miktarı UV spektrofotometrik ve refraktometrik analiz ile belirlendi.

İlk olarak, karbon tetraklorür içindeki bir çözeltiden anilin çıkarıldığında OPMOErKZ'nin adsorpsiyon özellikleri araştırıldı. Anilinin en iyi sorbent 3'ü emdiği ortaya çıktı (tablo).

0.01-0.0001 mol / l konsantrasyonlarında anilin sulu çözeltileri için de ölçümler yapıldı. Tablo, 0,01 M'lik bir çözüm için verileri gösterir.

20 ° C'de 0.01 M sulu anilin çözeltisinden çeşitli sorbentler tarafından anilin absorpsiyonu

Önceden, adsorpsiyonun belirtilen konsantrasyon aralığında arttığı ve doğrusal olarak kırılma indisine bağlı olduğu bulunmuştu. Anilin miktarı, "kırılma indeksi - molar konsantrasyon" grafik ilişkisinden belirlendi ve hem sıvı kromatografisi hem de UV spektral analizi verileriyle düzeltildi.

Sorbent 3, sulu çözeltiler için en aktif olanıdır.Adsorbe edilen kirletici miktarı, ilk çözeltiye eklenen toplam kirletici miktarı ile nihai çözeltide kalan miktarı arasındaki fark olarak hesaplanmıştır.

Çevresel nesnelerde PAH'ların belirlenmesi için yöntemler

Tipik olarak, PAH'ları belirlemek için gaz kromatografisi (GC) ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemleri kullanılır. kantitatif analiz için yeterli olan ana 16 PAH'ın ayrılması, gaz kromatografisinde kapiler kolonlar veya HPLC'de kullanılan yüksek performanslı kolonlar kullanılarak elde edilir. On altı PAH'ın kalibrasyon karışımlarını iyi ayıran bir sütunun, test numunelerinde eşlik eden organik bileşiklerin arka planına karşı da iyi ayrılacaklarını garanti etmediği unutulmamalıdır.

Analizi basitleştirmek ve elde edilen sonuçların yüksek kalitesini elde etmek için, analitik prosedürlerin çoğu, numunelerdeki diğer ilgili bileşik gruplarından PAH'ların ön izolasyonu (ayırma) aşamasını içerir. Düşük basınçlı sıvı-katı veya sıvı-sıvı sıvı kromatografi teknikleri bu amaç için en yaygın olarak silika jel veya alümina gibi adsorpsiyon mekanizmaları kullanılarak kullanılır, bazen de Sephadex kullanılarak adsorpsiyon ve eliminasyon gibi karışık mekanizmalar kullanılır.

Numunelerin ön saflaştırılmasının kullanılması, aşağıdakilerin etkisinden kaçınmayı mümkün kılar:

Alifatik hidrokarbonlar gibi tamamen polar olmayan bileşikler;

Ftalanlar, fenoller, polihidrik alkoller, asitler gibi orta ila yüksek düzeyde polar bileşikler;

Reçineler gibi yüksek moleküler ağırlıklı bileşikler.

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) esas olarak iki tip dedektör kullanır: bir florometrik dedektör veya bir fotodiyot dizisine sahip bir spektrofotometrik dedektör. Florometrik tespitte PAH'ların tespit limiti çok düşüktür, bu da bu yöntemi özellikle eser miktarlarda poliaromatik bileşiklerin tespiti için uygun hale getirir. Bununla birlikte, klasik florometrik dedektörler, incelenen bileşiğin yapısı hakkında pratik olarak hiçbir bilgi sağlamaz. Modern tasarımlar, bireysel bileşiklerin karakteristiği olan floresan spektrumlarının kaydedilmesini mümkün kılar, ancak bunlar rutin ölçümlerin pratiğinde henüz yaygınlaşmamıştır. Fotodiyot cetvelli (PDL) bir spektrofotometrik dedektör, UV ve görünür spektral aralıkta absorpsiyon spektrumlarının kaydedilmesini mümkün kılar, bu spektrumlar tanımlama için kullanılabilir. Benzer bilgiler, hızlı tarama dedektörleri kullanılarak elde edilebilir.

Bahsedilen PAH'ların ayrılması, tanımlanması ve nicel analizi için bir analitik teknik seçerken aşağıdaki koşullar dikkate alınmalıdır:

Test numunelerinde belirlenen içeriklerin seviyesi;

İlgili maddelerin sayısı;

Kullanılan analitik prosedür (ölçüm tekniği);

Seri ekipmanın yetenekleri.

İyonik yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile toprak alkali elementlerin ve magnezyumun belirlenmesi için bir yöntemin geliştirilmesi

Su analizi problemlerinin çözümüne olanak sağlayan yöntemlerin geliştirilmesi ve iyileştirilmesi analitik kimyada önemli bir problemdir. Yüksek basınçlı yüksek performanslı sıvı kromatografisinin geliştirilmesi, iyon değişim kromatografisinde iyon kromatografisi adı verilen yeni bir yönün gelişimini teşvik etti. İyon kromatografisi için sorbentlerin sentezi zordur, çünkü onlar için birçok gereksinim vardır. Ticari olarak temin edilebilen oldukça etkili katyon değiştiricilerin olmaması nedeniyle, bir değiştiricinin sentezlendiği dinamik olarak modifiye edilmiş bir ters faz kullanıldı: N-heksadesil-N-dekanoil-paraminobenoilsülfonik asit etil-diizopropilamonyum (DHDASK), burada SO 3 - katyon değişimi yapabilen grup. Değiştirici çözeltiyi geçtikten sonra, l = 260 nm'de absorpsiyon, bir plato ile 6.4 birim optik yoğunluğa (° E) ulaştı. Hesaplanan iyon değiştirme kapasitesi 15,65 µmol'dür. Alkali toprak elementlerinin ve magnezyumun katyonları spektrumun UV bölgesinde absorbe etmediğinden, sentezlenen UV absorbe edici eluent 1,4-dipiridinyum bütan bromür (DPB bromür) kullanılarak dolaylı UV tespiti kullanıldı. Halojen iyonları kolonun çelik kısımlarını tahrip ettiğinden, 1,4-dipiridinyumbütan bromür iyonu asetat iyonu ile değiştirildi. Kolon, eluent ile yıkandığında, değiştirici karşı iyon, etildiizopropilamonyum, UV emici 1,4-dipiridinyumbutan iyonu ile değiştirilir. Katyonların ayrılması, "ölçek katlama" modunda 0,4 A ölçeğinde optimal dalga boyu l = 260 nm'de gerçekleştirildi; kaydedicinin polaritesi tersine çevrildi. Çalışılan tüm katyonların ayrılması, kompleks yapıcı bir katkı maddesi olan oksalik asit eklenerek sağlandı. Mg 2+, Ca 2+, Sr 2+, Ba 2+ için tespit limitleri 8 μg / L'dir; 16 μg / L; 34 μg / L; Sırasıyla 72 μg / L. Seçilen koşullar altında, 10.6 +1.9 mg-iyon / l, Mg 2+ -2.5 + mg-iyon / l olan Ca2+ içeriği musluk suyu analiz edildi. Tekrarlanabilirlik hatası Ca 2+ için %-2,2'yi ve Mg 2+ için %1.4'ü geçmez.

Çevredeki kadmiyum komplekslerinin analizi

Biyosferdeki ağır metallerin göç mekanizmalarını incelemek için, doğada metallerin varlığının kimyasal formları hakkında verilere ihtiyaç vardır. En toksik metallerden birinin - kadmiyum - bileşiklerinin analizindeki zorluklar, kırılgan kompleksler oluşturması ve onları izole etmeye çalışırken doğal dengelerin bozulması ile ilişkilidir. Bu çalışmada, topraktaki ve bitkilerdeki kadmiyum bileşikleri, ekstrelerin kromatografik olarak ayrılmasına ve ardından bileşenlerin kimyasal analizle tanımlanmasına dayanan bir teknik kullanılarak araştırıldı. Bu yaklaşım, yalnızca kadmiyumun kimyasal formlarını tanımlamayı değil, aynı zamanda çevresel nesnelerdeki dönüşümlerini izlemeyi de mümkün kıldı.

OH-karbonhidrat ve polifenol grupları (flavonoidler dahil), C = O, fosfatlar, NH 2, NO 2, SH grupları, biyosfer nesnelerinde kadmiyum ile koordine edilir. Bu çalışmanın amaçları doğrultusunda, bu bileşik sınıflarını temsil eden bir dizi model ligand derlenmiştir. Model ligandların suda çözünür kadmiyum tuzları ile etkileşimi UV spektroskopisi ve HPLC ile araştırıldı.

Kadmiyum bileşiklerini izole etmek için özel olarak seçilmiş (Cd ile kompleks oluşturmayan) çözücüler ile ekstraksiyon kullandık. Böylece kadmiyumu, yakın kimyasal analoğu olan çinko hariç tüm ağır metallerden ayırmak mümkündür. Elde edilen ekstraktların kromatogramlarında kadmiyum ve çinko içeren pikler ditizonat formundaki metallerin bağlanmasıyla tespit edildi. Çinkodan ayırma için, pH 6-8'de Cd ve Zn komplekslerinin stabilitesindeki fark kullanıldı. İzole edilen Cd bileşikleri, elüsyon sırasında pH'da bir değişiklik ile HPLC ile tanımlandı. Kadmiyum bileşiklerinin toprak bileşenleri ve bitki dokuları ile bir analizi yapıldı ve bitkiler tarafından topraktan kadmiyum alımındaki bir artışa tepki olarak üretilen maddeler belirlendi. Flavonoidlerin, özellikle trisinin, tahıllarda koruyucu ajanlar, baklagillerde sisteinin alkoksi türevleri ve turpgillerde hem polifenoller hem de tiyoller olduğu gösterilmiştir.

BÖLÜM 4. HPLC EKİPMANI

DİZİLER ACCELA

Yeni ACCELA ultra yüksek performanslı sıvı kromatografı, en geniş akış hızı ve basınç aralığında çalışabilir ve hem geleneksel kolonlarda tipik HPLC ayrımı hem de sorbent partikül boyutu 2'den küçük olan kolonlarda ultra hızlı ve verimli ayırma sağlar. μm ultra yüksek basınçlarda (1000 atm'nin üzerinde).

Sistem, yüksek hızlı kromatografik ayırma için sadece 65 µl tutma hacmine ve 1000 barı aşan basınçlara sahip üç ayda bir gradyan giriş pompası içerir. otomatik örnekleyici ACCELA 30 saniyelik numune enjeksiyon döngüsünde çalışabilir ve en yüksek enjeksiyon tekrarlanabilirliğini sağlar. Diyot Dizi Dedektörü Hızlandırılmış PDA minimize edilmiş akış hücre hacmi (2 μL) ile yüksek hızlı kromatografi modu için optimize edilmiştir, patentli LightPipe teknolojisini kullanır ve kusursuz bir kromatografik sistem ve kolonların kullanılmasından kaynaklanan simetrik tepe şeklini korur.

Sistem, dünyadaki en güçlü ve en iyi HPLC / MS sistemlerini oluşturmak için kütle spektrometreleriyle mükemmel bir şekilde bütünleşir.

Her türlü uygulama için Thermo Electron'dan temin edilebilen 1,9 μm tane boyutuna sahip UHP kolonları

DİZİLER TSP

HPLC cihazlarının modüler tasarım ilkesi, müşterinin herhangi bir analitik görevi çözmek için ekipmanı esnek bir şekilde tamamlamasına olanak tanır ve değişirse, hızlı ve ekonomik olarak değiştirilebilir. Geniş modül yelpazesi, izokratikten dört bileşenli gradyan, mikro kolondan yarı hazırlayıcıya kadar değişen pompaları, mevcut tüm dedektörleri, el tipi enjektörlerden herhangi bir numune işleme özelliğine sahip otomatik numune alıcılara kadar numune enjeksiyon sistemlerini, ölçüm sonuçlarını işlemek ve hepsini kontrol etmek için güçlü bir yazılım içerir. sistem modülleri. Tüm modüller CSA, TUF / GS, FCC (EMI), VDE (EMI), ISO-9000'e göre sertifikalandırılmıştır, kompakttırlar, modern bir tasarıma sahiptirler, kullanımı kolaydır, yerleşik bir ekran ve self ile donatılmıştır. -diagnostic system, görev yöntemleri parametreleri oluşturmanıza ve kaydetmenize izin verir. "İyi Laboratuvar Uygulaması" (GLP) kriterlerini karşılarlar ve Rusya Federasyonu Ölçüm Cihazları Kaydı'nda listelenirler. Ölçüm raporları İngiltere, ABD, Almanya ve Fransa Farmakopelerine uygun olarak düzenlenmektedir.

TSP modüler sistemleri, en yüksek güvenilirlik ve operasyonel kararlılık ile karakterize edilir.

Modüllerin kombinasyonu, analiste bir yandan entegre bir sistemin tüm avantajlarını ve diğer yandan modüler bir sistemin esnekliğini sağlar. HPLC uygulamasının hangi alanında olursa olsun - farmakoloji, biyoteknoloji, çevre analizi, klinik analiz, yiyecek ve içecek analizi, petrokimya ve kimyasal analiz - bu cihaz kullanılmaz, her zaman en yüksek gereksinimlere uyacak şekilde en uygun şekilde yapılandırılır.

Hem araştırma hem de yüksek performanslı rutin sistemler şunları sağlar:

Yüksek verimli solvent gaz giderme

Küçük ve ultra küçük numune miktarlarını işleme yeteneği

Hem UV / VIS dedektörü hem de diyot dizisi ile en yüksek hassasiyet (opsiyonel 1 veya 5 cm optik yol uzunluğuna sahip ünlü LightPipe teknolojisi ile)

Farklı sütunlarla çalışma

En yüksek kantitasyon doğruluğu

Farklı numune hacimleri ile otomatik çalışma imkanı

Tutma süreleri rms hatası %0,3'ten az

Minimum sistem ayak izi

Parametrelerin en yüksek güvenilirliği ve kararlılığı.

Sörveyör LC Pompası- Dünyada mevcut olan tüm dört yollu gradyan pompaları arasında en iyi tutma süresi tekrarlanabilirliğine sahip HPLC pompası. Entegre dört kanallı bir vakumlu gaz giderici ve darbe sönümleyici, maksimum kantitasyon hassasiyeti ve doğruluğu için mükemmel temel stabilite sağlar.

Otomatik örnekleyici, en yüksek analiz performansını ve esnekliği sağlar. Standart şişelerden 96 ve 384 kuyulu mikroplakalara kadar çok çeşitli numune tepsileri neredeyse tüm uygulamaların ihtiyaçlarını karşılar. Yeni teknoloji neredeyse kayıpsız numune enjeksiyonu sağlar, toplam 5 μL numune hacminden bir otomatik numune alıcı ile neredeyse 5 μL numune enjekte edilir.

ARAŞTIRMACI

UV / Vis dedektörü ve PDA (Diode Array Detector)

Sörveyör UV / Vis- değişken dalga boyu UV / görünür ışık dedektörü, LightPipe teknolojisinin en yüksek hassasiyeti ile ekonomi ve güvenilirliğin bir birleşimidir. Geniş bir akış hücresi seçimi, bu dedektörü kapiler veya mikrokolon kromatografisinden yarı hazırlık ve hazırlayıcıya kadar tüm uygulamalar için çok yönlü hale getirir.

Sörveyör PDA'sı dedektör, tüm diyot dizili HPLC dedektörlerinin en duyarlısıdır. İki lambalı bir kaynağa sahip optikler, 190 ila 800 nm arasındaki tüm dalga boyu aralığını sorunsuz bir şekilde kapsar. Fiber optik ışık huzmesi şekillendirici, hassasiyetten ödün vermeden mükemmel optik çözünürlük sağlar.

sörveyör RI bir bilgisayardan tam elektronik kontrol ile minimum hacimli termostatlı küvete sahip refraktometrik dedektör.

sörveyör FL en yüksek hassasiyete ve floresan, kemilüminesans ve fosforesans algılama yeteneğine sahip florometrik tarama dedektörü.

Çok çeşitli otomatik numune alıcılar, biyokimyada ve klinik uygulamada yaygın olarak kullanılan hem geleneksel şişelerle hem de 96 konumlu plakalarla çalışmanıza olanak tanır. Onlarla çalışmak, katı faz ekstraksiyonu yöntemiyle numune hazırlamak için benzer plakaların kullanılmasıyla kolaylaştırılmıştır.

400 Elektrikli aktüatör, Valco loop (20 µl - standart), kısmi doldurma seçeneği ile.

Carousel 96 örnekleri.

Elektrikli sürücü, kolon fırını, Valco döngüsü (100 μL - standart) ve örnek hazırlama için kısmi doldurma seçeneği AutoMix modu. Örnek karusel: 84 x 2 ml (numuneler) + 3x 10 ml (reaktifler). Dahili kolon termostatı. 420

Tam, kısmi doldurma ve mikrolitre numune enjeksiyon modlarında çalışma yeteneği ile araştırma çalışması için döngü otomatik örnekleyici. Geniş karusel yelpazesi (standart - 96 numune).

96 ve 384 konumlu tabletlerle çalışmak için tablet otomatik örnekleyici. Numunenin basınç altında ilmeğe enjeksiyonu, 1 μL'den daha az numune enjeksiyonu olasılığı. Düz yataklı bir besleyici kurma imkanı. HPLC

HPLC ekipmanının başlıca üreticileri

· Waters - süper performans kromatografisi, kütle spektrometrisi, kolonlar, katı faz ekstraksiyonu;

Varyan, Inc. - kromatograflar ve kolonlar, katı faz ekstraksiyonu için aksesuarlar;

Agilent Technologies - kromatograflar ve kolonlar;

· Hypersil - kolonlar ve sorbentler.

Merck KGaA - TLC için TLC plakaları ve aksesuarları, kolonlar, sorbentler, HPLC için mobil fazlar, katı faz ekstraksiyonu için aksesuarlar

· Dionex - HPLC, özellikle iyon kromatografisi için ekipman ve kolonlar.

Edebiyat

1.Pilipenko A.T., Pyatnitsky I.V. Analitik Kimya. İki kitapta: kitap 1 - M.: Kimya, 1990, -480'ler.

1. Pilipenko A.T., Pyatnitsky I.V. Analitik Kimya. İki kitapta: kitap 2 - M.: Kimya, 1990, -480'ler.

2. Vasil'ev V.P. Analitik Kimya. 2 saat sonra, Bölüm 2. Fizikokimyasal analiz yöntemleri: Ders kitabı. Khimko için - technol. uzman. üniversiteler. - M.: Daha yüksek. shk., 1989. - 384s.

3. Hidrokimyasal malzemeler. Cilt 100. Yüzey suyu kalitesinin operasyonel izlenmesi için yöntemler ve teknik araçlar. L.: Gidrometeo-İzdat, 1991 .-- 200'ler.

4. Lurie Yu.Yu. Endüstriyel atık suların analitik kimyası / Yu.Yu. Lurie; M.: Khimiya, 1984 .-- 448s.

5. Ewing G. Enstrümantal kimyasal analiz yöntemleri / Per. İngilizceden M.: Mir, 1989 .-- 348 s.

6. Görelik D.O., Konopelko L.A., Pankov E.D. Çevresel izleme. 2 ciltte SPb.: Noel. 2000 .-- 260 s.

7. Ayvazov B.V. Kromatografiye giriş. M.: Daha yüksek. shk., 1983 .-- 450 s.

8. Goldberg K.A., Vigdergauz M.S. Gaz Kromatografisine Giriş. M.: Kimya, 1990 .-- 329 s.

9. Stolyarov B.V. ve diğerleri // Pratik gaz ve sıvı kromatografisi. SPb.: SPbGU, 1998. - S. 81.

11. Gorshkov A.G., Marinaite I.I. HPLC - çevresel nesnelerdeki PAH'ları izlemek için bir yöntem

12. Torosyan G.O., Martirosyan V.A., Aleksanyan A.R., Zakaryan M.O. Haddelenmiş bakır tortusunun atık aluminotermik indirgenmesi kullanılarak anilinin sulu çözeltilerden uzaklaştırılması

13. Los Angeles Turkina, G.N. Koroleva İyonik yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile toprak alkali elementlerin ve magnezyumun belirlenmesi için bir yöntemin geliştirilmesi

14. Dultseva G.G., Dubtsova Yu.Yu., Skubnevskaya G.I. Çevredeki kadmiyum komplekslerinin analizi

KROMATOGRAFİK YÖNTEMLERLE SUDA KLOMAZONE TAYİNİ

METODOLOJİK TALİMATLAR MUK 4.1.1415-03

1. Hazırlayan: Federal Hijyen Bilim Merkezi F.F.

Erisman; Moskova Tarım Akademisi. K.A.

Timiryazev; Rusya Sağlık Bakanlığı Devlet Sıhhi ve Epidemiyolojik Denetleme Dairesi'nin katılımıyla. Yöntem geliştiriciler sonunda listelenmiştir.

3. Devlet Sağlık Başhekimi tarafından onaylanmıştır

Rusya Federasyonu Sağlık Bakanı Birinci Yardımcısı Acad. RAMS G.G. Onishchenko 24 Haziran 2003

5. İlk kez tanıtıldı.

1. Giriş bölümü

Üretici: FMS (ABD).

Ticari isim: KOMUT.

Aktif madde: klomazon.

2-(2-klorobenzil)-4,4-dimetil-3-izoksalidin-3-on (IUPAC)

Açık kahverengi viskoz sıvı.

Erime noktası: 25 -C.

Kaynama noktası: 275 -C.

25 -C'de buhar basıncı: 19,2 MPa.

Bölme katsayısı n-oktanol / su: K logP = 2.5.

Aseton, heksan, etanol, metanol içinde iyice çözelim,

kloroform, diklorometan ve asetonitril; sudaki çözünürlük -

1.10 gr / cc dm. Oda sıcaklığında en az 2 yıl, 50 -C'de - en az 3 ay stabildir.

Kısa toksikolojik özellik: Akut oral

sıçanlar için toksisite (LD) - 1369 - 2077 mg / kg; akut dermal

sıçanlar için toksisite (LD) - 2000 mg / kg'dan fazla; keskin

sıçanlar için inhalasyon toksisitesi (LC) - 4.8 mg / cu. dm (4 saat).

Hijyenik standartlar. Suda MPC - 0.02 mg / cu. dm.

İlacın kapsamı. Clomazone, soya fasulyesi ve pirinçte tahıl ve dikotiledonlu yabani otlarla mücadelede çıkış öncesi veya ekim öncesi uygulama ile kullanılan seçici bir herbisittir.

2. Suda klomazon tayini için yöntem

kromatografik yöntemler

2.1. Temel Hükümler

2.1.1. Yöntem ilkesi

Teknik, analiz edilen numuneden heksan ile klomazon ekstraksiyonuna, ekstraktın konsantrasyonuna ve ardından alternatif yöntemlerle kantitatif belirlemeye dayanır:

ile yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC)

UV dedektörü, sabit rekombinasyon oranı dedektörlü gaz sıvı kromatografisi (GLC) veya ince tabaka kromatografisi (TLC). Miktar tayini mutlak kalibrasyon yöntemi ile gerçekleştirilir.

2.1.2. Yöntem seçiciliği

Önerilen koşullar altında, yöntem, küresel çevresel kirleticilerin varlığında spesifiktir: sikloparafinlerin klor türevleri (HCH izomerleri), difenil bileşikleri (DDT ve türevleri), bunların metabolitleri - poliklorlu benzenler ve fenoller ve ayrıca mevcudiyetinde. Ekinlerde herbisit olarak kullanılabilen sodyum trikloroasetat.

2.1.3. Yöntemin metrolojik özellikleri (P = 0.95)

Reaktifler, solüsyonlar ve malzemeler

d.v. içeriği ile Clomazone %99.8

(FMS, ABD)

Azot, ve GOST 9293-79

Amonyak suyu, %25, h GOST 1277-81

Aseton, h GOST 2603-79

n-Heksan, h GOST 2603-79

Hidrojen peroksit, %30 sulu çözelti GOST 10929-77

İzopropil alkol, reaktif sınıfı TU 6-09-402-75

Sülfürik asit, kimyasal olarak saf GOST 4203-77

Hidroklorik asit (hidroklorik asit), reaktif sınıfı GOST 3118-77

Metil alkol, reaktif sınıfı GOST

Sodyum hidroksit, reaktif sınıfı, %25 sulu çözelti GOST 4323-77

Susuz sodyum sülfat, reaktif sınıfı GOST 1277-81

Gümüş nitrat, reaktif sınıfı GOST 1277-81

2-Fenoksimetanol, h TU 6-09-3688-76

Kromaton N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 mm)

%5 SE-30, Hemapol, Çek Cumhuriyeti

Kromaton N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 mm) s 1,5

ОV-17 + %1,95 QF-1, Hemapol, Çek Cumhuriyeti

HPTLC (SSCB) için Plakalar

Plakalar "Kieselgel 60 F-254" (Almanya)

Kayıtlar "Silufol" Çek Cumhuriyeti

Beyaz şerit kağıt filtreler, külsüz ve hekzan ile önceden yıkanmış TU 6-09-2678-77

2.3. Cihazlar, aparatlar, tabaklar

Milichrom sıvı kromatografı

ultraviyole dedektörlü

Çelik kromatografik kolon,

uzunluk 64 mm, iç çap 2 mm,

Silasorb 600 ile doldurulmuş, tane boyutu 5 mikron

Gaz kromatograf serisi "Renkli" veya

benzer, sabit bir dedektörle donatılmış

limitli rekombinasyon oranı (RPR)

lindan 4 x 10 g / cc için algılama. santimetre

Cam kromatografik kolon, uzunluk

1 veya 2 m, iç çap 2 - 3 mm

Mikroşırınga, MSh-10 tipi, 10 µl kapasiteli TU 5E2-833-024

Çalkalama aparatı, tip AVU-6s TU 64-1-2851-78

Banyo suyu TU 64-1-2850-76

Analitik terazi, tip VLA-200 GOST 34104-80E

Kromatografik oda GOST 10565-74

Su jeti pompası GOST 10696-75

Cıva-kuvars ışınlayıcı OKN-11 TU 64-1-1618-77

Cam püskürtücüler GOST 10391-74

Döner vakumlu evaporatör IR-1M

veya benzeri TU 25-11-917-76

Kompresör kurulumu TU 64-1-2985-78

Kurutma dolabı TU 64-1-1411-76E

Ayırma hunileri GOST 3613-75

100 ml kapasiteli hacimsel şişeler GOST 1770-74

10, 50 ml kapasiteli ölçüm silindirleri GOST 1770-74E

İnce kesitli armut biçimli şişeler,

100 ml kapasiteli GOST 10394-72

100 ml kapasiteli konik şişeler GOST 22524-77

Santrifüj tüpleri, hacimsel GOST 25336-82E

0.1, 1, 2, 5 ve 10 ml kapasiteli pipetler GOST 20292-74

Huniler, kimyasal, konik, çap

34 - 40 mm GOST 25336-82E

2.4. Örnek seçimi

Numune alma, saklama ve numunelerin hazırlanması, ilgili mevzuata uygun olarak gerçekleştirilir.

08.21.79 tarih ve N 2051-79 kapsamında onaylanan "Pestisitlerin Eser Miktarlarının Belirlenmesi için Tarımsal Ürünler, Gıda Ürünleri ve Çevresel Nesnelerin Numune Alınmasına İlişkin Birleştirilmiş Kurallar"

Toplanan örnekler buzdolabında 5 güne kadar saklanabilir. Analizden önce su (askıya alınmışsa) gevşek bir kağıt filtreden süzülür.

2.5. Belirleme için hazırlık

2.5.1. HPLC yöntemi

2.5.1.1. HPLC için bir mobil faz hazırlama

100 ml kapasiteli bir ölçülü balona 5 ml izopopanol ve 5 ml metanol bir pipetle konur, işarete heksan ile eklenir, karıştırılır, süzülür.

2.5.1.2. sütun koşullandırma

HPLC kolonunu 30 dakika boyunca heksan-metanol-izopropanol (90:5:5 v/v) ile yıkayın. 100 µl / dak'lık bir solvent besleme hızında.

2.5.2. GLC yöntemi. Kolon hazırlama ve şartlandırma

Bitmiş ambalaj (Chromaton N-AW-DMCS üzerinde %5 SE-30) bir cam kolona dökülür, vakum altında kapatılır, kolon bir dedektöre bağlanmadan bir kromatograf termostatına kurulur ve bir nitrojen akışında stabilize edilir. 10 - 12 saat boyunca 250 -C'lik bir sıcaklık.

2.5.3. TLC yöntemi

2.5.3.1. Geliştirme reaktiflerinin hazırlanması

2.5.3.1.1. Geliştirme reaktifi N 1

1 gr gümüş nitrat 1 ml distile suda çözülür, 10 ml 2-fenoksimetanol, 190 ml aseton, 1-2 damla hidrojen peroksit eklenir, çözelti karıştırılır ve koyu renkli cam şişeye aktarılır.

2.5.3.2.2. Reaktif N 2 geliştirme

0,5 g gümüş nitrat 100 ml'lik ölçülü balonda 5 ml saf suda çözülür, 10 ml %25 sulu amonyak eklenir, çözelti aseton ile 100 ml'ye getirilir, karıştırılır ve koyu renkli cam bir şişeye aktarılır.

2.5.3.2. TLC için mobil fazın hazırlanması

100 ml kapasiteli ölçülü balona 20 ml aseton ekleyin ve işarete kadar heksan ekleyin, karıştırın. Karışım, 30 dakikada 6 - 8 mm'den fazla olmayan bir tabaka ile kromatografik hazneye dökülür. Kromatografiden önce.

2.5.4. Standart çözeltilerin hazırlanması

100 μg / ml içerikli temel bir standart klomazon çözeltisi, 100 ml'lik bir ölçülü balonda heksan içinde %99.8 ai içeren 0.010 g müstahzarın çözülmesiyle hazırlanır. Çözelti bir ay boyunca buzdolabında tutulur.

0,4 konsantrasyonlu çalışma standart çözümleri; 1.0; 2.0; 4.0; 10.0; 20 ve 40.0 µg/ml, heksan ile uygun seri seyreltme yoluyla bir stok standart klomazon çözeltisinden hazırlanır.

Çalışma çözümleri buzdolabında bir aydan fazla saklanmaz.

2.5.5. Kalibrasyon grafiği oluşturma

2.5.5.1. Kalibrasyon tablosu A (madde 2.7.1, HPLC'ye göre ölçüm)

Bir kalibrasyon grafiği oluşturmak için, kromatograf enjektörüne 4.0 konsantrasyonlu 5 ul çalışan standart klomazon çözeltisi enjekte edilir; 10.0; 20.0 ve 40 μg / ml.

2.5.5.2. Kalibrasyon grafiği B (Madde 2.7.2, GLC'ye göre ölçüm)

Bir kalibrasyon grafiği oluşturmak için, kromatograf buharlaştırıcısına 0,4 konsantrasyonlu 5 µl çalışan standart klomazon çözeltisi enjekte edilir; 1.0; 2.0; 4.0 ve 10.0.

En az 5 paralel ölçüm alınır. Her konsantrasyon için kromatografik tepe yüksekliğinin ortalama değerini bulun. Kromatografik pikin mm cinsinden yüksekliğinin μg / ml cinsinden çözeltideki klomazon konsantrasyonuna bağımlılığı için bir kalibrasyon grafiği (A veya B) çizilir.

2.6. tanım açıklaması

100 ml analiz edilen su numunesi 250 ml kapasiteli bir ayırma hunisine konulur, 10 ml %25 sulu sodyum hidroksit çözeltisi dökülür, karıştırılır ve 20 ml n-heksan eklenir. Huni 3 dakika çalkalanır, fazlar ayrıldıktan sonra heksan tabakası, katlanmış bir kağıt üzerinde konik bir huni içine yerleştirilmiş bir susuz sodyum sülfat tabakasından geçirilerek 100 ml kapasiteli armut biçimli bir şişeye dökülür. filtre. İlacın sulu numuneden ekstraksiyonu, her biri 20 ml n-heksan kullanılarak iki kez daha tekrarlanır. Birleştirilen heksan özü, neredeyse kuru bir sıcaklıkta 40°C'lik bir döner vakumlu buharlaştırıcıda buharlaştırılır, tortu, bir hava akımı veya yüksek saflıkta nitrojen ile üflenir. Kuru kalıntı 0.1 (HPLC, TLC) veya 0.25 ml (GLC) n-heksan içinde çözülür ve kromatografik yöntemlerden biri ile analiz edilir.

2.7. kromatografik koşullar

Ultraviyole dedektörlü Milichrom sıvı kromatografı (Rusya).

64 mm uzunluğunda çelik kolon, 2 mm iç çap,

tane boyutu 5 mikron olan Silasorb 600 ile doldurulmuştur.

Sütun sıcaklığı: oda sıcaklığı.

Mobil faz: heksan-izopropanol-metanol (hacimce 90:5:5).

Eluent akış hızı: 100 µl / dak.

Çalışma dalga boyu: 240 nm.

Hassasiyet: 0,4 birim ölçekte emilim.

Enjekte edilen numune hacmi: 5 µl.

Clomazone bırakma süresi: yaklaşık 6 dakika.

Doğrusal algılama aralığı: 20 - 200 ng.

40 µg/ml standart solüsyondan daha yüksek pikler veren numuneler, HPLC mobil faz ile seyreltilir.

Sabit iyon rekombinasyon hızı dedektörü ile gaz kromatografı "Tsvet-570".

1 m uzunluğunda, 3 mm iç çaplı, %5 SE-30 (0,16 - 0,20 mm) ile Chromaton N-AW-DMCS ile doldurulmuş cam kolon.

Elektrometrenin çalışma ölçeği 64 x 10 10 Ohm'dur.

Teyp kaydedicinin hızı 200 mm / s'dir.

Sütun fırın sıcaklığı - 190 -C

dedektör - 300 -C

evaporatör - 220 -C

Taşıyıcı gaz (azot) akış hızı - 60 ml / dak.

Enjekte edilen numunenin hacmi 5 ul'dir.

Klomazonun salınma süresi 2,5 dakikadır.

Doğrusal algılama aralığı: 2 - 50 ng.

10 µg/ml standart solüsyondan daha büyük pikler veren numuneler heksan ile seyreltilir.

Numunede yakın alıkonma süresine sahip gama-HCH varlığında klomazon tanımlamasının doğruluğunu arttırmak için, konsantre sülfürik asit ile muamele edilerek numuneden klomazon çıkarılır. Numunenin yeniden analizi, klomazonun birincil kromatografik sinyale katkısını belirlemeyi mümkün kılar.

Madde 2.6'ya göre nicel olarak elde edilen bir şişedeki heksan çözeltisi

(veya alikotu) "Silufol", "Kieselgel 60F-254" veya "HPTLC Plakaları" kromatografik plakalarına uygulanır. Standart çözeltiler, klomazon 1, 2, 5 ve 10 μg içeriğine karşılık gelen bir hacimde yan yana uygulanır. Plaka, bir n-heksan-aseton karışımı (hacimce 4:1) içeren bir kromatografi odasına yerleştirilir. Kromatogramın geliştirilmesinden sonra, plaka hazneden çıkarılır, çözücüler buharlaşana kadar bir taslak altına yerleştirilir, daha sonra geliştirici reaktiflerden biri ile işlenir ve 5 dakika boyunca bir ultraviyole lambasının altına yerleştirilir. Silufol, HPTLC ve Kizelgel 60F-254 plakalarındaki ilaç lokalizasyon bölgesi, Rf değerleri sırasıyla 0.35, 0.85 ve 0.43 olan gri-kahverengi noktalar olarak görünmektedir. TLC ile klomazonu belirlemek için "Alugram" ve "Polygram" (Almanya'da üretilmiştir) plakalarını kullanabilirsiniz. Bu plakalar üzerindeki klomazonun Rf değerleri sırasıyla 0.37 ve 0.38'dir.

3. Güvenlik gereksinimleri

Organik çözücüler, toksik maddeler, elektrikli ısıtma cihazları ile çalışırken genel kabul görmüş güvenlik kurallarına uymak gerekir.

4. Ölçüm hatası kontrolü

Ölçüm hatası ve tekrarlanabilirliğin operasyonel kontrolü, MI 2335-95 tavsiyelerine göre gerçekleştirilir. GSI "Kantitatif kimyasal analiz sonuçlarının iç kalite kontrolü".

5. Geliştiriciler

Yudina T.V., Fedorova N.E. (FNTSG, adını F.F. Erisman'dan almıştır).

E.I. Davidyuk (UkrNIIGINTOKS, Kiev); Kisenko M.A., Demchenko V.F. (Bilimler Akademisi Mesleki Tıp Enstitüsü ve Ukrayna Tıp Bilimleri Akademisi, Kiev).

HPLC yöntemi kimya, petrokimya, biyoloji, biyoteknoloji, tıp, gıda endüstrisi, çevre koruma, ilaç üretimi ve daha birçok alanda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Analiz edilen veya ayrılan maddelerin ayrılma mekanizmasına göre, HPLC, adsorpsiyon, dağıtım, iyon değişimi, boyut dışlama, ligand değişimi ve diğerlerine ayrılır.

Normal faz HPLC

Sabit faz, hareketli olandan daha polardır; bu nedenle, ayrıştırıcının bileşiminde polar olmayan bir çözücü baskındır:

Heksan: izopropanol = 95: 5 (düşük polariteli maddeler için)
Kloroform: metanol = 95: 5 (orta polar maddeler için)
Kloroform: metanol = 80:20 (yüksek polar maddeler için)

Ters faz HPLC

Ters fazlı HPLC için tipik eluentler şunlardır:

asetonitril: su
metanol: su
izopropanol: su

HPLC matrisleri

Matrisin ana özellikleri:

Parçacık boyutu (μm);
İç gözenek boyutu (Å, nm).

HPLC için silika jelin hazırlanması:

Polisilisik asit mikrokürelerinin oluşturulması;
Silika jel parçacıklarının kurutulması;
Hava ayırma.

emici parçacıklar:

Normal (küresel): daha yüksek basınç direnci, daha yüksek maliyet;
Küresel olmayan: daha düşük basınç direnci.

Sabit faz greftleri

Normal Faz HPLC:

Propil nitril aşılamalı (nitril) sabit faz;
Propilamin aşılamalı (amin) sabit faz.

Ters Fazlı HPLC:

Alkil aşılama ile sabit faz;
Alkilsilil aşılama ile sabit faz.

HPLC dedektörleri

UV
diyot matrisi
Floresan
elektrokimyasal
refraktometrik
kitle seçici

Bağlantılar

Wikimedia Vakfı. 2010.

Diğer sözlüklerde "Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi"nin ne olduğunu görün:

Terim yüksek performanslı sıvı kromatografisi İngilizce terim yüksek performanslı sıvı kromatografisi Eşanlamlılar Kısaltmalar HPLC, HPLC İlgili terimler adsorpsiyon, oligopeptit, proteomik, sorbent, fulleren, endohedral, kromatografi ... ...

Sıvı kromatografisi, ayırma verimini arttırmak için, basınç altında (3x107 Pa'dan fazla) bir solvent (eluent), küçük çaplı partiküller (1 μm'ye kadar) ve perfüzyon ...

Hareketli fazın bir sıvı (eluent) olduğu ve durağan olan bir tür kromatografi. sorbent, televizyon. yüzeyine sıvı veya jel uygulanmış bir taşıyıcı. Bir sorbent (kolon kromatografisi) ile doldurulmuş bir kolonda, düz bir zeminde gerçekleştirilir ... ... Doğal bilim. ansiklopedik sözlük

- [κρώμα (υroma) rengi] karışımın tek tek bileşenlerinin (sıvı veya gaz) adsorbanın yüzeyinde hem taşıyıcı akıştan emilirken hem de ... . .. jeolojik ansiklopedi

- (diğer Yunancadan ... Wikipedia

Kromatografi terimi İngilizce terim kromatografi Eşanlamlılar Kısaltmalar İlgili terimler yüksek performanslı sıvı kromatografisi, klatrat, çip üzerinde laboratuvar, porozimetri, proteom, proteomik, sorbent, enzim, fulleren, endohedral ... ... Nanoteknolojinin Ansiklopedik Sözlüğü

Ayrıştırmaya dayalı sıvı kromatografisi. ayrılan iyonların fiksir ile iyon değiştirme yeteneği. ikincisinin iyonojenik gruplarının ayrışmasının bir sonucu olarak oluşan sorbent iyonları. Katyonların ayrılması için katyon değiştiriciler kullanılır, ... ... kimyasal ansiklopedi

HPLC- yüksek performanslı sıvı kromatografisi ... Rus dilinin kısaltmaları sözlüğü

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), hem analitik kimyada hem de kimya teknolojisinde yaygın olarak kullanılan karmaşık madde karışımlarının ayrılması için en etkili yöntemlerden biridir. Kromatografik ayırmanın temeli katılımdır ... Wikipedia

Kitabın

Pratik Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi, Veronica R. Mayer. Modern yöntem ve donanımlarla genişletilen kitabın 5. baskısını okuyucunun beğenisine sunuyoruz. Kitapta pek çok şey geliştirildi ve çok sayıda bağlantı eklendi. Metinde yer alan yerler...

(OFS 42-0096-09)

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), mobil fazın (PF) sıvı olduğu bir kolon kromatografisi tekniğidir.

olmayan maddelerle dolu bir kromatografik kolonda hareket eden kemik

mobil faz (sorbent). HPLC kolonları, kolonun girişinde yüksek hidrolik basınçlara sahiptir, bu nedenle HPLC'ye bazen

vyvayut "yüksek basınçlı sıvı kromatografisi".

Maddelerin ayrılma mekanizmasına bağlı olarak, aşağıdakiler ayırt edilir:

HPLC seçenekleri: adsorpsiyon, dağıtım, iyon değişimi,

özel, kiral, vb.

Adsorpsiyon kromatografisinde, maddelerin ayrılması, farklı adsorpsiyon ve desorpsiyon yetenekleri nedeniyle meydana gelir.

gelişmiş bir yüzeye sahip bir adsorbanın yüzeyi, örneğin silika jel.

Dağıtım HPLC'de, ayrılacak maddelerin durağan maddeler arasındaki dağılım katsayılarının farklı olması nedeniyle ayrılma meydana gelir.

(genellikle hareketsiz bir desteğin yüzeyine kimyasal olarak aşılanır) ve

mobil aşamalar.

PP ve NF'nin polaritesine göre, HPLC normal faz ve hacim olarak ikiye ayrılır.

genişletilmiş faz

Normal fazlı kromatografi, bir varyant olarak adlandırılır.

polar bir sorbent kullanın (örneğin, silika jel veya

bükülmüş NH2 - veya CN grupları) ve polar olmayan PF (örneğin, geliştirilmiş heksan

kişisel eklemeler). Ters faz kromatografisinde,

polar olmayan kimyasal olarak değiştirilmiş sorbentler kullanın (örneğin,

polar olmayan alkil radikali C18) ve polar mobil fazlar (örneğin,

metanol, asetonitril).

İyon değişim kromatografisinde, bir karışımdaki maddelerin molekülleri, ayrışma

Çözeltide katyonlara ve anyonlara dönüşürler, hareket ederken ayrılırlar.

iyonik ile farklı döviz kurları nedeniyle sorbent (katyon veya anyon)

sorbent grupları.

Dışlamada (elek, jel nüfuz eden, jel-filtreleme)

kromatografi, maddelerin molekülleri, sabit fazın gözeneklerine farklı nüfuz etme yetenekleri nedeniyle büyüklüklerine göre ayrılır. Bu durumda, ilk eş-

sabit fazın minimum sayıdaki gözeneklerine nüfuz edebilen en büyük moleküller (en yüksek moleküler ağırlığa sahip) ortaya çıkar,

ve ikincisi, küçük boyutlu moleküllere sahip maddelerdir.

Ayırma genellikle birer birer değil, aynı anda birkaç mekanizma ilerler.

HPLC yöntemi, herhangi bir olumsuzluğun kalitesini kontrol etmek için kullanılabilir.

elmacık analitleri. Analiz için uygun aletleri kullanın - sıvı kromatograflar.

Bir sıvı kromatografın bileşimi genellikle aşağıdaki temel bilgileri içerir:

herhangi bir düğüm:

– Mobil fazlı (veya kapasitif) bir kap içeren PF hazırlama ünitesi

mobil fazın parçası olan bireysel solventlerle

zy) ve PF gaz giderme sistemi;

– pompalama sistemi;

– mobil fazlı karıştırıcı (gerekirse);

– numune enjeksiyon sistemi (enjektör);

– kromatografik kolon (bir termostata monte edilebilir);

- dedektör;

– veri toplama ve işleme sistemi.

pompalama sistemi

Pompalar, belirli bir sabit hızda kolona PF beslemesi sağlar. Mobil fazın bileşimi sabit veya değişken olabilir.

analiz sırasında. İlk durumda, sürece izokratik denir,

ve ikinci degradede. Pompalama sisteminin önüne bazen kurulur.

mobil fazın filtrasyonu için 0,45 µm gözenek çapına sahip filtreler. Modern

Sıvı kromatograf pompalama sistemi, bir bilgisayar tarafından kontrol edilen bir veya daha fazla pompadan oluşur. Bu, eş değiştirmeyi sağlar.

Gradyan elüsyonu sırasında belirli bir programa göre PF olmak. küçük

Karıştırıcıdaki PF bileşenleri hem düşük basınçta hem de oluşabilir

(pompalardan önce) ve yüksek basınçta (pompalardan sonra). Karıştırıcı, PP'nin hazırlanması ve izokratik elüsyon için kullanılabilir,

bununla birlikte, daha doğru bir bileşen oranı, ön hazırlık ile elde edilir.

izokratik bir süreç için PF bileşenlerinin karıştırılması. Analitik HPLC için pompalar, kolon girişinde 50 MPa'ya kadar bir basınçta 0,1 ila 10 ml / dak aralığında kolona sabit bir PP akış hızının korunmasına izin verir. Ancak bu değerin aşılmaması tavsiye edilir.

Şalo 20 MPa. Basınç titreşimleri özel sönümleme ile en aza indirilir

pompaların tasarımına dahil olan demirli sistemler. Üzerinde çalışma parçaları

pompalar, PF'nin bileşiminde agresif bileşenlerin kullanılmasına izin veren korozyona dayanıklı malzemelerden yapılmıştır.

Mikserler

Tasarımları gereği mikserler statik veya dinamik olabilir.

zihinsel.

Mikserde tek hareketli faz oluşur.

Gerekli karışım önceden hazırlanmadıysa, pompalar tarafından sağlanan ayrı çözücüler. Çözücülerin karıştırılması genellikle kendiliğinden gerçekleşir, ancak bazen zorunlu karıştırma sistemleri kullanılır.

dikiş.

enjektörler

Enjektörler, numune enjeksiyonu için çok yönlü olabilir

1 µl ila 2 ml veya yalnızca belirli bir hacimde bir numuneyi enjekte etmek için ayrı

ema. Her iki enjektör türü de otomatik olabilir ("otomatik enjektörler" veya "otomatik numune alıcılar"). Numunenin (çözelti) enjeksiyonu için enjektör yer almıyor

doğrudan kromatografik sütunun önünde. Enjektörün tasarımı, PF akışının yönünü değiştirmeye ve numunenin belirli bir hacimli bir döngüye (genellikle 10 ila 100 μL) ön enjeksiyonu gerçekleştirmeye izin verir.

Bu hacim menteşe etiketinde belirtilmiştir. Enjektör tasarımı, döngünün değiştirilmesine izin verir. Analiz edilen çözümün bilinmeyene tanıtılması için

domates enjektörü, hacmi olan manuel bir mikro şırıngadır.

döngü hacmini önemli ölçüde aşıyor. Enjekte edilen çözeltinin fazlalığı,

döngüde atılır ve tam ve her zaman eşit hacimde numune kolona enjekte edilir. Döngünün manuel olarak eksik doldurulması doğruluğu azaltır

dozlama doğruluğu ve tekrarlanabilirliği ve bu nedenle doğruluğu bozar

kromatografik analizin kalitesi ve tekrarlanabilirliği.

kromatografik sütun

Kromatografik kolonlar genellikle paslanmaz çelik, cam veya emici madde ile doldurulmuş ve kapalı plastik tüplerdir.

her iki tarafta 2–5 µm gözenek çapına sahip filtrelerle. analitik uzunluk

kolon, kromatografik ayırma mekanizmasına bağlı olarak, 5 ila 60 cm aralığında veya daha fazla olabilir (genellikle

10-25 cm), iç çap - 2 ila 10 mm (genellikle 4,6 mm). Mikro kolon kromunda iç çapı 2 mm'den küçük kolonlar kullanılır.

tografi. İç çapları olan kapiler kolonlar da kullanılmaktadır.

rom yaklaşık 0,3-0,7 mm. Hazırlayıcı kromatografi için sütunların iç çapı 50 mm veya daha fazladır.

Analitik kolonun önüne kısa kablolar takılabilir.

çeşitli yardımcı işlevleri yerine getiren sütunlar (koruma sütunları)

(daha sık - analitik sütunun korunması). Genellikle analiz bir bilgisayar ile gerçekleştirilir.

Bununla birlikte, ayırma verimliliğini artırmak için sıcaklık ve

analiz süresini azaltmak için bir termostat kullanılabilir

60 C'den yüksek olmayan sıcaklıklarda tirovanie kolonları. Daha yüksek sıcaklıklarda, sorbentin yok edilmesi ve PF'nin bileşiminde bir değişiklik mümkündür.

Sabit faz (sorbent)

Genellikle sorbent olarak kullanılır:

1. Normal şartlarda silika jel, alüminyum oksit, gözenekli grafit kullanılır.

küçük faz kromatografisi. Bu durumda tutma mekanizması

çay - genellikle adsorpsiyon;

2. Asidik veya bazik gruplara sahip reçineler veya polimerler. Uygulama alanı - iyon değişim kromatografisi;

3. Gözenekli silika jel veya polimerler (boyut dışlama kromatografisi);

4. Kimyasal olarak değiştirilmiş sorbentler (aşılı sorbentler

zami), en sık silika jel bazında hazırlanır. Çoğu durumda tutma mekanizması,

nuh ve durağan fazlar;

5. Kimyasal olarak değiştirilmiş kiral sorbentler, örneğin,

sulu selülozlar ve amilozlar, proteinler ve peptitler, siklodekstrinler,

enantiyomerlerin ayrılması için kullanılır (kiral kromatografi

Aşılı fazlara sahip sorbentler, değişen derecelerde kimyasal maddelere sahip olabilir.

teknik değişiklik. Emici partiküller küresel olabilir veya olmayabilir.

düzenli şekil ve çeşitli gözeneklilik.

En yaygın olarak kullanılan aşılanmış fazlar şunlardır:

– oktil grupları(sorbent oktilsilan veya C8);

– oktadesil grupları(sorbent oktadesilsilan

(ODS) veya C18);

– fenil grupları(fenilsilan emici);

– siyanopropil grupları(CN emici);

– aminopropil grupları(NH2 sorbenti);

- diol grupları (sorbent diol).

Çoğu zaman, analiz polar olmayan aşılanmış fazlar üzerinde gerçekleştirilir.

C18 sorbent kullanılarak ters faz modu.

Bazı durumlarda normal uygulama yapılması daha uygundur.

faz kromatografisi. Bu durumda, polar olmayan çözücülerle kombinasyon halinde silika jel veya polar aşılanmış fazlar ("CN", "NH2", "diol") kullanılır.

Aşılı fazlı sorbentler, üretici tarafından aksi belirtilmedikçe, 2,0 ila 8,0 pH değerlerinde kimyasal olarak stabildir.

Emici partiküller, küresel veya düzensiz şekillere ve çeşitli gözeneklere sahip olabilir. Analitik HPLC'de sorbentin partikül boyutu genellikle 3-10 µm'dir, hazırlayıcı HPLC'de - 50 µm veya daha fazladır.

Monolitik sorbentler de kullanılır.

Sorbent parçacıklarının yüksek yüzey alanı (mikroskobik olmalarının bir sonucu olarak) ile yüksek ayırma verimliliği sağlanır.

boyut ve gözeneklerin varlığı), ayrıca sorbent bileşiminin tekdüzeliği ve yoğun ve tek biçimli ambalajı.

dedektörler

Çeşitli algılama yöntemleri kullanılır. Genel durumda, kromatografik kolondan sonra içinde çözünen bileşenlere sahip PP

Ki, özelliklerinden birinin veya diğerinin (spektrumun UV veya görünür bölgesinde absorpsiyon, floresan,

kırılma indisi, elektriksel iletkenlik, vb.). Ortaya çıkan kromatogram, bazı fiziksel faktörlerin bağımlılığının bir grafiğidir.

veya zamana karşı PF'nin fizikokimyasal parametresi.

En yaygın olanları spektrofotometrik de-

optikte bir değişiklik kaydeden tectors (diyot matrisi dahil)

ultraviyole yoğunluğu, görünür ve genellikle yakın kızılötesi

190 ila 800 veya 900 nm arasındaki spektral bölgeler. Bu durumda kromatogram

çay, PF'nin optik yoğunluğunun zamana bağımlılığını temsil eder.

Geleneksel olarak kullanılan spektrofotometrik dedektör,

Çalışma aralığındaki herhangi bir dalga boyunda algılama yapabilir.

alan. Çoklu dalga boyu dedektörleri de kullanılır, bu da

aynı anda birkaç dalga boyunda algılama sağlamak için.

Bir diyot dizi dedektörü yardımıyla, sadece birkaç dalga boyunda bir kerede algılama yapmak değil, aynı zamanda pratik olarak anlık algılama yapmak da mümkündür.

FS'nin optik spektrumunu herhangi bir anda (taramadan) elde etmek için, bu da ayrılan bileşenlerin kalitatif analizini büyük ölçüde basitleştirir.

bileşenler.

Floresan dedektörlerin duyarlılığı, spektrofotometrik olanların duyarlılığından yaklaşık 1000 kat daha fazladır. Bu durumda, belirlenecek maddenin kendisi floresan yaymıyorsa, ya içsel floresan ya da karşılık gelen türevlerin floresansı kullanılır. Modern

floresan dedektörler sadece kromatografik elde etmeye izin vermez

gram, aynı zamanda analizin uyarma ve floresan spektrumlarını kaydetmek için

bağlantılar.

UV ve görünür spektral bölgelerde (örneğin karbonhidratlar) absorbe etmeyen numuneleri analiz etmek için refraktometrik dedektörler kullanılır.

(refraktometreler). Bu dedektörlerin dezavantajları, düşük (spektrofotometrik dedektörlere kıyasla) hassasiyetleri ve sinyal yoğunluğunun önemli bir sıcaklığa bağımlılığıdır (dedektör termostatlı olmalıdır).

Elektrokimyasal dedektörler de kullanılır (kondüktometrik

gökyüzü, amperometrik, vb.), kütle spektrometrik ve Fourier-IR

dedektörler, ışık saçılım dedektörleri, radyoaktivite ve diğer bazı

Mobil aşama

V PP olarak, hem bireysel hem de karışımları olmak üzere çeşitli çözücüler kullanılabilir.

V normal faz kromatografi genellikle sıvı karbon kullanır

levodorodlar (heksan, sikloheksan, heptan) ve diğer nispeten polar olmayan

küçük polar organik bileşikler ilaveli çözücüler,

PF'nin ayrıştırma gücünü düzenleyen.

Ters fazlı kromatografide, PF polar içerir

ganik çözücüler (genellikle asetonitril ve metanol) ve su. tercih için

ayırmalar genellikle belirli bir sulu çözeltiler kullanır

pH, özellikle tampon çözeltiler. Katkı maddeleri inorganik kullanılır

kimyasal ve organik asitler, bazlar ve tuzlar ve diğer bileşikler (için

örneğin, enantiyomerlerin akirallere ayrılması için kiral değiştiriciler

sorbent).

pH değerinin kontrolü, organik bir çözücü ile karışımı için değil, sulu bileşen için ayrı olarak yapılmalıdır.

PF, gerektiğinde genellikle iki olmak üzere bir çözücüden oluşabilir.

erişim - üç veya daha fazla. PP'nin bileşimi, içerdiği çözücülerin hacim oranı olarak belirtilir. Bazı durumlarda, kütle

özel olarak belirtilmesi gereken oran.

Bir UV spektrofotometrik dedektörü kullanırken, PF, algılama için seçilen dalga boyunda belirgin bir absorpsiyona sahip olmamalıdır. Belirlerken şeffaflık veya optik yoğunluk sınırı

belirli bir üreticinin çözücünün spesifik dalga boyu genellikle belirtilir

ambalaj üzerinde bulundu.

Kromatografik analiz, PF'nin saflık derecesinden büyük ölçüde etkilenir, bu nedenle üretilen solventlerin kullanılması tercih edilir.

özellikle sıvı kromatografisi için (su dahil).

PP ve analiz edilen çözeltiler çözünmeyen içermemelidir

parçacıklar ve gaz kabarcıkları. Laboratuvar koşullarında elde edilen su

Su ile önceden karıştırılmış sulu çözeltiler, organik çözeltiler

Aletler ve ayrıca analiz edilen solüsyonlar ince filtrasyona ve gazdan arındırmaya tabi tutulmalıdır. Filtreleme genellikle bu amaçlar için kullanılır.

verilen çözücü veya çözeltiye göre 0.45 µm inert gözenek boyutuna sahip bir membran filtreden vakum altında.

Veri toplama ve işleme sistemi

Modern veri işleme sistemi bir arayüzdür.

yüklü olan kromatografa bağlı kişisel bilgisayar

kaydetmenizi ve işlemenizi sağlayan yazılım

matogramın yanı sıra kromatografın çalışmasını kontrol etmek ve ana

kromatografik sistemin parametreleri.

Belirtilecek kromatografik koşulların listesi

Özel bir monografta, ortak

kolonlar, partikül boyutunun bir göstergesi olan sorbent tipi, kolon sıcaklığı (gerekirse, termostatlama), enjekte edilen numunenin hacmi (döngü hacmi),

PF'ye dönüşme ve hazırlanma yöntemi, PF besleme hızı, dedektör ve algılama koşulları, gradyan modunun tanımı (eğer kullanılıyorsa), kromatografi süresi.

İYON DEĞİŞİMİ VE İYONİK HPLC

İyon değişim kromatografisi hem organik hem de organik maddelerin analizi için kullanılır.

(heterosiklik bazlar, amino asitler, proteinler vb.) ve inor-

ganik (çeşitli katyonlar ve anyonlar) bileşikleri. bileşenlerin ayrılması

İyon değiştirme kromatografisinde analiz edilen karışımın içeriği, analiz edilen maddelerin iyonlarının iyonik gruplarla tersinir etkileşimine dayanır.

pami sorbenti. anyonitler veya katyon-

sen. Bu sorbentler esas olarak polimerik iyoniktir.

değişim reçineleri (genellikle aşılı stiren ve divinilbenzen kopolimerleri)

iyonik gruplar) veya aşılanmış iyon değişim grupları olan silika jeller. - (СН2) 3 N + X– gruplarına sahip sorbentler, anyonları ayırmak için kullanılır ve - (СН2) SO3 - Н + gruplarına sahip sorbentler katyonları ayırmak için kullanılır.

Genellikle polimer reçineleri anyonları ayırmak için kullanılır ve

katyonların sızması - modifiye silika jeller.

İyon değişim kromatografisinde PF olarak asitlerin, bazların ve tuzların sulu çözeltileri kullanılır. Tampon yarışlar yaygın olarak kullanılır.

belirli pH değerlerini korumanıza izin veren kremler. Küçük katkı maddeleri, suyla karışabilen organik maddeler kullanmak da mümkündür.

kimyasal çözücüler - asetonitril, metanol, etanol, tetrahidrofuran.

iyon kromatografisi- iyon değişim kromatografisinin bir çeşidi,

analitin iyonlarının konsantrasyonunu belirlemek için

kondüktometrik dedektör kullanır. Son derece hassas işlemler için

PF dedektöründen geçen iletkenlikteki değişikliklerin belirlenmesi, PF'nin arka plan iletkenliğinin düşük olması gerekir.

İyon kromatografisi için iki ana seçenek vardır.

Bunlardan ilki, elektrolizin elektriksel iletkenliğinin bastırılmasına dayanmaktadır.

arasında bulunan ikinci bir iyon değişim sütunu kullanarak PF

litik kolon ve dedektör. Bu sütunda nötralizasyon gerçekleşir.

PF ve analiz edilen bileşikler, deiyonik ortamda dedektör hücresine girer.

Su. Tespit edilen iyonlar tek iyonlardır.

PF iletkenliği sağlar. Bastırıcı kolonun dezavantajı, onu oldukça kısa aralıklarla yenileme ihtiyacıdır.

Ben. Bastırıcı kolon, sürekli hareket eden bir kolon ile değiştirilebilir.

zarın bileşiminin sürekli olduğu bir zar baskılayıcı

yönde hareket eden rejenerasyon solüsyonunun akışı ile yenilenir,

PF akış yönünün tersi.

İyon kromatografisinin ikinci çeşidi, tek sütunlu iyon kromatografisidir.

matografi. Bu versiyonda çok düşük elektrik iletkenliğine sahip bir PF kullanılmaktadır.

su içeriği. Zayıf organik bileşikler elektrolit olarak yaygın olarak kullanılmaktadır.

skik asitler - benzoik, salisilik veya izoftalik.

ÖZEL HPLC

Boyut dışlama kromatografisi (boyut dışlama kromatografisi), moleküllerin boyutlarına göre ayrılmasına dayanan özel bir HPLC türüdür. Dağıtım

Sabit ve hareketli fazlar arasındaki moleküller, molekülün boyutuna bağlıdır.

leküller ve kısmen onların şekli ve polaritesi. Ayırma için bir

gözenekli emiciler - polimerler, silika jel, gözenekli camlar ve polisakaritler.

Sorbentlerin partikül boyutu 5-10 µm'dir.

Gözenekli camların ve silika jelin avantajları, PP ve analit moleküllerinin gözeneklere hızlı difüzyonu, çeşitli koşullar altında (yüksek sıcaklıklarda bile) stabilitedir. polimer sorben-

Siz stiren ve divinilbenzenin kopolimerlerisiniz (bunlar hidro-

polar olmayan mobil fazlar ile kullanılan fobik sorbentler) ve

sülfonatlı divinilbenzen veya poliakrilamid reçinelerinden yapılan hidrofilik jeller.

Gözenekli bir durağan faz ile moleküllerin iki sınırlayıcı etkileşimi mümkündür. Boyutu ortalama gözenek çapından a daha büyük olan moleküller, sorbent içine hiç girmez ve hareketli faz ile birlikte ayrıştırılır.

ilk sen. Sor- 'un gözenek boyutundan çok daha küçük bir çapa sahip moleküller

benta serbestçe içine nüfuz eder, en uzun süre sabit fazda kalır ve en son elute edilir. Orta büyüklükteki moleküller, boyuta ve kısmen de şekline bağlı olarak sorbentin gözeneklerine nüfuz eder. arasında farklı alıkonma süreleri ile elute edilirler.

en büyük ve en küçük moleküllerimiz. Kromatografiye tabi tutulan numunenin bileşenlerinin ayrılması, tekrarlanan ak-

numune bileşenlerinin emici maddenin gözeneklerine difüzyonu ve bunun tersi.

tutulmasını karakterize etmek için boyut dışlama kromatografisinde

PF akış hızı ve tutma süresinin ürününe eşit bir tutma hacmi kullanır.

Mobil aşama. PP seçimi sorbent tipine bağlıdır. Özel-

ny kromatografisi genellikle jel filtrasyonu ve jel filtrasyonu olarak ikiye ayrılır.

penetrasyon kromatografisi.

ayırmak için jel filtrasyon kromatografisi yöntemi kullanılır.

hidrofilik sorbentler üzerinde suda çözünür bileşiklerin Mobil fazlar, belirli bir pH değerine sahip sulu tampon çözeltilerdir.

Jel geçirgenlik kromatografisinde, hidrofobik sor-

kıvrımlar ve polar olmayan organik çözücüler (toluen, diklorometan, tet-

rahidrofuran). Bu yöntem, düşük çözünürlüğe sahip bileşikleri analiz etmek için kullanılır.

suda çember.

Dedektörler. Diferansiyel refraktometrik dedektörler ve ayrıca spektrofotometrik dedektörler (spektrumun kızılötesi bölgesindekiler dahil), boyut dışlama kromatografisinde dedektör olarak kullanılır.

Viskometrik ve akış lazer dedektörleri de kullanılır.

Bu dedektörler, bir refraktometre veya başka bir konsantrasyon ile birlikte

dedektör, molekül ağırlığını sürekli olarak belirlemenizi sağlar.

PF'de kireç.

ULTRA VERİMLİ SIVI KROMATOGRAFİSİ

Ultra performanslı sıvı kromatografisi, daha verimli olan sıvı kromatografisinin bir çeşididir.

klasik HPLC ile karşılaştırıldığında.

Ultra performanslı sıvı kromatografisinin bir özelliği,

1.5 ila 2 mikron partikül boyutuna sahip sorbentlerin kullanımı kullanılmaktadır. Boyutlar

matografik sütunlar genellikle 50 ila 150 mm uzunluğunda ve 1 ila

4 mm çapa kadar. Enjekte edilen numunenin hacmi 1 ila 50 µl arasında olabilir.

Klasikte kullanılan kromatografik ekipman